[發明專利]一種小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法

有效

• 申請號: 201410604627.8
• 申請日: 2014-10-30
• 公開（公告）號: CN104447932B
• 公開（公告）日: 2017-10-31
• 發明（設計）人: 陳榮潔;曾恕芬;任楊帆;鄭立雄;陳金東
• 申請（專利權）人: 云南維和藥業股份有限公司
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00;C07J9/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司53100
• 代理人: 金耀生

1.一種小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

步驟（1），蒸柜蒸制：將富含大極性或中等極性達瑪烷型四環三萜配糖體的植物原料粉碎，過10-14mm篩，用純化水以1:0.5-1的料液質量比潤制1-2小時，放入蒸柜中以100-120℃的溫度蒸制10-12小時，取出后干燥，得到制含小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的原料；

步驟（2），超聲波提取：將步驟（1）得到的富含小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的原料粉碎，過20-40目篩后，用原料5-10倍量質量濃度為70-98%的乙醇超聲提取3次，每次0.5-2小時，過濾，提取液減壓濃縮至無醇味，回收乙醇，得濃縮液；

步驟（3），高分子絮凝澄清：將步驟（2）得到的濃縮液加水稀釋1.5-3倍，得到稀釋液，將稀釋液加熱至70-90℃，加入稀釋液體積1-3%的高分子絮凝劑液B組分，攪拌均勻，然后加入稀釋液體積1-3%高分子絮凝劑液A組分，攪拌均勻，再于60-90℃下控溫攪拌10-40min，放置，冷卻至室溫，離心，上清液存入儲罐，不溶物用水攪拌，過濾，濾液存入儲罐；所述的高分子絮凝劑液A組分所使用的絮凝劑包括101果汁澄清劑、甲殼素、ZTC天然澄清劑、明膠、鞣酸或蛋清；所述的高分子絮凝劑液B組分所使用的絮凝劑包括101果汁澄清劑、甲殼素、ZTC天然澄清劑、明膠、鞣酸或蛋清；但高分子絮凝劑液A組分與高分子絮凝劑液B組分所使用的絮凝劑不相同；

步驟（4），大孔吸附樹脂柱層析：在層析柱中均勻裝入大孔吸附樹脂，樹脂經預處理活化后，自頂部將步驟（3）儲罐中的液體加入層析柱中，用水洗脫至洗脫液無色無味后，用質量濃度為70-98%乙醇洗脫，每小時洗脫流量為柱體積的2-8倍，用薄層層析檢測，至洗脫液無達瑪烷型四環三萜配糖體特征斑點，即停止洗脫，將乙醇洗脫液存入儲罐；

步驟（5），離子交換樹脂柱層析：在層析柱中均勻裝入離子交換樹脂，樹脂經預處理活化后，將步驟（4）得到的乙醇洗脫液自頂部泵入，用質量濃度為70-98%乙醇洗脫，每小時洗脫流量為柱體積的2-8倍，用薄層層析檢測，至洗脫液無達瑪烷型四環三萜配糖體特征斑點，即停止洗脫，收集洗脫液；

步驟（6），濃縮干燥：將步驟（5）得到的洗脫液采用膜濃縮設備濃縮，噴霧干燥，即得到小極性達瑪烷型四環三萜配糖體產品。

2.根據權利要求1所述的小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于步驟（1）所述的富含大極性或中等極性達瑪烷型四環三萜配糖體的植物原料包括人參、三七或西洋參這些富含大極性或中等極性達瑪烷型四環三萜配糖體的植物地下部分和地上部分。

3.根據權利要求1所述的小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于步驟（1）中所述的干燥采用熱風循環干燥箱，所述的蒸制采用全自動控溫控壓蒸柜蒸制。

4.根據權利要求1所述的小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于步驟（3）所述的高分子絮凝劑液A組分的制備方法為取絮凝劑，邊攪拌邊加入純化水至完全溶解，放置，過濾，取濾液，即得；所述的高分子絮凝劑液B組分的制備方法為取絮凝劑，邊攪拌邊加入質量濃度為0.5-2.5%冰醋酸溶液至其完全溶解，放置，過濾，取濾液，即得。

5.根據權利要求1所述的小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于步驟（4）中所述的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹脂。

6.根據權利要求1所述的小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于步驟（4）中所述的大孔吸附樹脂樹脂的預處理方法為：將大孔吸附樹脂置于沉淀缸內，用水浸泡，過濾后再加入質量濃度75-98%乙醇，乙醇液面高出大孔吸附樹脂2-5cm，攪拌均勻，放置15-36h，裝入層析柱，用2-5倍柱體積質量濃度75-98%的乙醇沖洗，然后用水洗凈大孔吸附樹脂上的乙醇，用質量濃度為3-5%鹽酸溶液洗滌，鹽酸溶液的用量為2-5倍柱體積，接著用水洗至中性，再以質量濃度為3-5%氫氧化鈉溶液洗滌，氫氧化鈉溶液用量為2-5倍柱體積，最后用水洗至中性即得。

7.根據權利要求1所述的小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于步驟（5）中所述離子交換樹脂柱層析所用的離子交換樹脂包括強酸型離子交換樹脂或弱酸型離子交換樹脂。

8.根據權利要求1所述的小極性達瑪烷型四環三萜配糖體的制備方法，其特征在于步驟（5）中所述樹脂預處理活化方法為：將離子交換樹脂置于沉淀缸內，用質量濃度為75-98%乙醇浸泡15-36h，攪拌均勻，裝入層析柱，然后加入質量濃度為75-98%乙醇洗滌，75-98%乙醇洗滌用量為2-5倍柱體積，然后用去離子水洗凈離子交換樹脂上的乙醇后，用質量濃度為2-8%鹽酸溶液洗滌，鹽酸溶液的用量為2-6倍柱體積，接著用水洗至中性，再以質量濃度為3-8%氫氧化鈉溶液洗滌，氫氧化鈉溶液用量為3-6倍柱體積，最后用水洗至中性，待用。