[發明專利]一種檢測破壁鮮嫩果蔬原料中的細胞破壁率的方法

在審

• 申請號: 201410604266.7
• 申請日: 2014-10-30
• 公開（公告）號: CN104345024A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 張典典;劉曉娟;周揚銘;鄭偉
• 申請（專利權）人: 廣州市祈和電器有限公司
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 楊曉松

技術領域

本發明屬于食品檢測方法技術領域，特別涉及一種檢測破壁鮮嫩果蔬原料中的細胞破壁率的方法。

背景技術

植物細胞是植物生命活動與功能的基本單位，由原生質體和細胞壁兩部分組成，所有營養、功能均包含在原生質體內。植物細胞壁的存在在一定程度上影響了人體對食材中營養功能成分的快速吸收。因此，在人體食用前，使用各種“破壁技術”打破食材中植物細胞的細胞壁，可以提高人體對營養功能成分的吸收效率和吸收速度。

“破壁技術”是一種常用的食品加工技術。按照是否存在外加作用力，可分為機械法和非機械法；按照物理和非物理方法可分為物理法和化學法。物理方法中根據破壁溫度又可分為低溫物理破壁，超低溫物理破壁；根據用力情況也可分為高速撞擊破壁、剪切力破壁等，非物理方法主要有化學試劑法及生物酶解法。目前，食品加工過程中常用的一些操作方式如攪拌、打漿、粉碎、擠壓等均屬于破壁技術中的一種。市場上售賣的各種各樣的攪拌機、打漿機實際上就是一種細胞破壁機，其主要原理就是采用一些新型材料、通過設計不同的刀片形狀、增加電機馬力加大轉速等辦法將攪拌、打漿、粉碎等技術集合一起，使原料在短時間內達到高破壁率的效果。為衡量某種設備或某種技術的功能作用大小，我們常常需要利用原料處理前后破壁細胞的數量多少(即細胞破壁率的高低)來作比較，因此針對不同原料制定細胞破壁率的檢測方法是非常重要的。

目前，最成熟的檢測方法就是針對花粉和孢子類原料制定的細胞破壁率的檢測方法，國家也有相關標準(如NY/T?1677-2008破壁靈芝孢子粉破壁率的測定)，因為可以將破壁前后的原料加入某種合適溶劑制成相同濃度的均勻懸浮液，然后通過制片，在顯微鏡下(帶血球計數板)直接觀察并統計出具有完整細胞壁的花粉或孢子的數量，以此計算細胞破壁率。另外，就干燥的中草藥原料而言，應用超細粉碎技術對細胞破壁率的影響研究方面也有論文發表(主要為湖南中醫藥大學超微工程技術研究中心發表的論文)，其中也涉及到細胞破壁率的計算方法，但其中一個明顯的缺陷就是用細粉(100目)中的顯微特征物的數量作為細胞未破碎的基數以此計算細胞破壁率，最后得出的破壁率明顯超高，數據不準確，方法也難以令人信服。

就鮮嫩的果蔬原料如蘋果、西瓜、西紅柿、甜菜根、小白菜等而言，目前未見有關于細胞破壁率檢測方法方面的論文報道。其原因主要在于實驗過程中沒辦法使破壁前原料中的單個細胞分離且在分離過程中要求細胞盡量不受到損傷，也就無法計算一定質量或一定體積的中未破壁的細胞數，因此也沒辦法檢測這一類原料使用破壁加工技術之后的細胞破壁率的大小，即目前沒辦法比較某種破壁加工技術或某種破壁加工設備對此類原料的作用大小。

發明內容

為了克服現有技術中存在的不足和缺點，本發明的目的在于提供一種檢測破壁鮮嫩果蔬原料中的細胞破壁率的方法。

本發明目的通過以下技術方案實現：

一種檢測破壁鮮嫩果蔬原料中的細胞破壁率的方法，按照以下操作步驟：

(1)制備完整細胞測試液：將鮮嫩果蔬原料剪成規格長×寬×高為0.1cm×0.1cm×0.1cm并混勻；精密稱取1.00g上述剪碎并混勻的材料置于普通陶瓷研缽中，同時準備50.00ml溶劑備用；用研杵在研磨速度為10～12轉/分鐘、研磨力度小于0.05牛頓的情況下將原料在研缽中均勻研磨5～7分鐘；研磨過程中根據原料的不同加入0～5ml備用溶劑于研缽中以方便研磨；研磨結束后，將漿液倒入容器中，并用上述備用溶劑多次洗滌研缽和缽杵至轉移干凈為止；合并漿液、洗滌液和剩余備用溶劑，此液體則為完整細胞測試液；

(2)制備破壁細胞測試液：精密稱取1.00g經過破壁加工技術處理的待測鮮嫩果蔬原料置于容器中，加入50.00ml溶劑，攪拌制成懸浮液，此懸浮液即為破壁細胞測試液；

(3)細胞破壁率的檢測

a、準備能夠應用血球計數板進行計數的顯微鏡和血球計數板；

b、分別搖勻或用玻棒攪勻上述完整細胞測試液和破壁細胞測試液后立即進行取樣和裝片處理，裝片時要使測試液布滿血球計數板上的整個玻片；取樣體積為0.5μl；

c、裝片后將玻片置于顯微鏡下觀察，調整顯微鏡焦距，確定合適的觀察倍數；

d、在顯微視野下，根據原料的不同，選擇適宜的顯微特征物作為細胞破壁率測定的典型顯微特征物并進行計數。

e、按以下公式計算細胞破壁率：細胞破壁率(％)＝(完整細胞測試液中典型顯微特征物數量-破壁細胞測試液中典型顯微特征物數量)/完整細胞測試液中典型顯微特征物數量×100％。