[發明專利]一種骨骼肌脫細胞基質生物補片及其制備方法

在審

• 申請號: 201410604161.1
• 申請日: 2014-10-30
• 公開（公告）號: CN104383601A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 顧巖;楊志;楊建軍;宋致成;聶鑫;王恵春;劉正尼
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 上海晨皓知識產權代理事務所(普通合伙) 31260
• 代理人: 成麗杰

技術領域

本發明涉及生物醫學工程技術領域，特別涉及一種生物補片及其制備方法。

背景技術

脫細胞基質生物補片作為常用的生物修復材料，來源于牛、豬、馬、人等哺乳動物的小腸粘膜下層、皮膚、膀胱、心包等這些富含膠原的組織。經過脫細胞技術處理后，保留有正常細胞外基質的三維立體結構。生物補片植入到缺損處，能起到很好的支架作用，填補受損部位的缺失組織，并在該材料的誘導下，促進宿主細胞在其三維結構上生長并分泌細胞外基質，形成自身組織并完成在缺損部位的修復重建，完成器官組織再生的過程。生物補片憑借其具有的完全可降解性、較好的生物相容性及促進宿主組織長入等優點，越來越受到醫學研究者的關注。

脫細胞基質補片主要由膠原、糖蛋白、彈性纖維、粘多糖、生長因子構成。膠原成分占細胞外基質干重的90％；肝素、硫酸肝素、軟骨素A和B、透明質酸等粘多糖結合有生長因子和細胞因子成分，他們促進細胞外基質保留水分并維持凝膠狀形態；VEGF和TGF-β等生長因子雖然總量不多，但它們在調節細胞遷移、增殖和分化方面具有重要作用。這些脫細胞基質支架植入人體或動物體內后容易降解，降解后形成單肽類結構物質，對宿主組織和細胞具有趨化性和促進其增殖分化等作用。盡管這些生物補片有的取自異體組織，但由于去除了引起宿主免疫排斥反應的成分，只保留有同源性的細胞外基質成分，故組織相容性較好，移植后很少產生排斥反應。

除此之外，ECM還具有傳遞信號分子的作用，這種信號分子的傳遞作用表現在ECM支架的降解過程中。ECM支架除了具有很多生物結構大分子外還含有大量生長因子等活性成分。同時，在伴隨支架降解過程中會釋放一些可溶性的單肽片段，相應支架的結構會發生改變，抑制ECM支架降解的肽類會被合成和釋放，并啟動化學交聯過程，從而調節宿主組織對ECM支架的重塑步驟。

骨骼肌脫細胞基質生物補片來源于肌肉組織，肌肉組織主要由肌細胞和肌細胞分泌的細胞外基質組成。其中骨骼肌細胞外基質不僅具備像其他組織來源的細胞外基質的生物活性成分和結構，而且由于骨骼肌組織擁有良好的收縮性和豐富的毛細血管，其細胞外基質成分中I，IV等膠原和生長因子等活性成分含量非常高。因此骨骼肌脫細胞基質補片是一種具有很好應用前景的生物支架。

發明內容

本發明的目的在于提供一種骨骼肌脫細胞基質生物補片及其制備方法，按照該方法制得的骨骼肌脫細胞基質生物補片在徹底除去存在于組織表面和內部的細胞的基礎上，更好地保留骨骼肌的三維框架微結構。

為解決上述技術問題，本發明的實施方式提供的骨骼肌脫細胞基質的制備方法，包含以下步驟：

(1)前期處理：取已死亡動物的腹直肌肌肉組織，沖洗除去表面的血凝塊，在無菌條件下剔除表面的脂肪組織和筋膜組織，再次沖洗；

(2)脫細胞處理：將上述經過前期處理后的腹直肌組織進行反復凍融，然后漂洗，浸入到質量濃度為1～10％的烷基糖苷溶液中，常溫下振蕩12～24小時；將烷基糖苷廢液倒掉，沖洗；再加入含DNA酶和RNA酶的MgCl₂溶液中，在37℃下振蕩24～36小時，將組織取出，沖洗；

(3)凍干和消毒：將上述經過脫細胞處理后的腹直肌組織進行凍干處理，然后以γ射線輻射滅菌，即制得骨骼肌脫細胞基質生物補片。

本發明的實施方式提供了一種骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法。相對于現有技術中的骨骼肌脫細胞基質制備方法，本發明的實施方式所提供的方法簡單、有效、成本低，在徹底除去存在于組織表面和內部的細胞的基礎上，更好地保留有骨骼肌的三維框架微結構，具有較好的力學性能和生物活性。