[發明專利]一種骨骼肌脫細胞基質生物補片及其制備方法

在審

• 申請號: 201410604161.1
• 申請日: 2014-10-30
• 公開（公告）號: CN104383601A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 顧巖;楊志;楊建軍;宋致成;聶鑫;王恵春;劉正尼
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 上海晨皓知識產權代理事務所(普通合伙) 31260
• 代理人: 成麗杰

1.一種骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)前期處理：取已死亡動物的腹直肌肌肉組織，沖洗除去表面的血凝塊，在無菌條件下剔除表面的脂肪組織和筋膜組織，再次沖洗；

(2)脫細胞處理：將上述經過前期處理后的腹直肌肌肉組織進行反復凍融，然后漂洗，浸入到質量濃度為1～10％的烷基糖苷溶液中，常溫下振蕩12～24小時；將烷基糖苷廢液倒掉，沖洗；再加入含DNA酶和RNA酶的MgCl₂溶液中，在37℃下振蕩24～36小時，將組織取出，沖洗；

(3)凍干和消毒：將上述經過脫細胞處理后的腹直肌肌肉組織進行凍干處理，然后以γ射線輻射滅菌，即制得骨骼肌脫細胞基質生物補片。

2.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中取已死亡動物的腹直肌肌肉組織時，供體動物為?；蜇i，取材時間為動物死亡后30分鐘內。

3.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中的兩次沖洗操作所采用的沖洗液為含有鏈霉素和青霉素的去離子水或PBS緩沖液；所述青霉素在所述沖洗液中的濃度為100μg/ml、所述鏈霉素在所述沖洗液中的濃度為100μg/ml。

4.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中反復凍融的方法為：將所述腹直肌肌肉組織置于-80℃冰箱3～6小時，然后取出放在37℃水浴箱中30～60分鐘。

5.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中反復凍融的次數為3次。

6.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的兩次振蕩操作均在搖床中進行，搖床的轉速為100～150rpm/min。

7.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的MgCl₂溶液的濃度為0.05mol/L。

8.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述MgCl₂溶液中含DNA酶的濃度為100～200μg/ml，含RNA酶的濃度為100～200μg/ml。

9.根據權利要求1所述的骨骼肌脫細胞基質生物補片的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中凍干處理的方法為：置于-60～-50℃真空冷凍干燥機進行凍干18～24小時。

10.一種骨骼肌脫細胞基質生物補片，所述骨骼肌脫細胞基質生物補片根據權利要求1至9中任一項所述的方法制備得到。