[發明專利]基于PCR-RFLP鑒定金銀花品系大毛花和雞爪花的方法

有效

• 申請號: 201410599277.0
• 申請日: 2014-10-30
• 公開（公告）號: CN104328180A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 黃璐琦;袁媛;蔣超;胡添源
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種用于鑒定金銀花品系大毛花和雞爪花的試劑盒，含有由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對，以及限制性內切酶MfeI或其同裂酶。

2.權利要求1所述的試劑盒在鑒定或輔助鑒定待測金銀花為大毛花品系還是雞爪花品系中的應用。

3.一種鑒定或輔助鑒定待測金銀花為大毛花品系還是雞爪花品系的方法，包括如下步驟：

(1)以待測金銀花的基因組DNA為模板，采用由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對進行PCR擴增；

(2)采用限制性內切酶MfeI對步驟(1)所得PCR產物進行完全酶切；

(3)按照如下方法確定所述待測金銀花的品系：若經步驟(2)酶切獲得的DNA片段為如下(a1)，則所述待測金銀花為或候選為大毛花品系；若經步驟(2)酶切獲得的DNA片段為如下(a2)或(a3)，則所述待測金銀花為或候選為雞爪花品系：

(a1)大小分別為102bp和177bp的兩個DNA片段；

(a2)大小為279bp單一DNA片段；

(a3)大小為102bp、177bp和279bp的三個DNA片段。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，大小為102bp的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列3的第1-102位，大小為177bp的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列3的第103-279位，大小為247bp的DNA片段的核苷酸序列為序列表中序列4。

5.一種用于鑒定金銀花品系大毛花和雞爪花的引物對，為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對。

6.權利要求5所述的引物對在鑒定或輔助鑒定待測金銀花為大毛花品系還是雞爪花品系中的應用。

7.一種鑒定或輔助鑒定待測金銀花為大毛花品系還是雞爪花品系的方法，包括如下步驟：

(1)以待測金銀花的基因組DNA為模板，采用權利要求5所述的引物對進行PCR擴增，得到PCR產物；

(2)按照如下方法確定所述待測金銀花的品系：若所述PCR產物為如下(b1)，則所述待測金銀花為或候選為大毛花品系；若所述PCR產物為如下(b2)或(b3)，則所述待測金銀花為或候選為雞爪花品系：

(b1)單一PCR產物：核苷酸序列為序列表中序列3所示的DNA片段；

(b2)單一PCR產物：核苷酸序列為序列表中序列4所示的DNA片段；

(b3)兩種PCR產物：核苷酸序列為序列表中序列3所示的DNA片段，以及核苷酸序列為序列表中序列4所示的DNA片段。

8.根據權利要求3、4或7所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，進行所述PCR擴增時采用的退火溫度為52-58℃。

9.權利要求1所述試劑盒的制備方法，包括將序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子以及限制性內切酶MfeI或其同裂酶分別單獨包裝的步驟。

10.權利要求5所述引物對的制備方法，包括將序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝的步驟。