[發(fā)明專利]鑒別鼓槌石斛和球花石斛的分子特異性標記引物及方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410593364.5 | 申請日: | 2014-10-29 |
| 公開(公告)號: | CN104313162A | 公開(公告)日: | 2015-01-28 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 王慧中;馮尚國;史鈺軍;何仁鋒;陳喆 | 申請(專利權(quán))人: | 杭州師范大學(xué) |
| 主分類號: | C12Q1/68 | 分類號: | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司: | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200 | 代理人: | 杜軍 |
| 地址: | 310036 浙江省*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 鑒別 鼓槌 石斛 分子 特異性 標記 引物 方法 | ||
1.?鑒別鼓槌石斛和球花石斛的分子特異性標記引物,其特征在于該引物核苷酸序列如下:
上游引物GCF:5’-CAAGCAGGGGCTAATGCTGCTGC-3’,如SEQ?ID?NO.1所示;
下游引物GCR:5’-ATGGATCGACGCATGGTTTGGGA-3’,如SEQ?ID?NO.2所示。
2.如權(quán)利要求1所述的分子特異性標記引物在鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum中的應(yīng)用。
3.一種利用如權(quán)利要求1所述的分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法,其特征在于該方法是首先提取待測石斛標本基因組DNA作為模板,以分子特異性標記引物GCF/GCR作為擴增引物,進行PCR擴增,得到擴增產(chǎn)物;然后對擴增產(chǎn)物進行電泳檢測:若電泳結(jié)果出現(xiàn)582?bp的DNA條帶,則待測石斛樣本為鼓槌石斛D.?chrysotoxum;若電泳結(jié)果未出現(xiàn)582?bp的DNA條帶,則待測石斛樣本為球花石斛D.?thyrsiflorum。
4.如權(quán)利要求3所述的利用如權(quán)利要求1所述分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法,其特征在于所述的分子特異性標記引物GCF/GCR,其核苷酸序列如下:
上游引物GCF:5’-CAAGCAGGGGCTAATGCTGCTGC-3’,如SEQ?ID?NO.1所示;
下游引物GCR:5’-ATGGATCGACGCATGGTTTGGGA-3’,如SEQ?ID?NO.2所示如權(quán)利要求3所述的利用如權(quán)利要求1所述分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法,其特征在于該方法僅適用于待測標本為鼓槌石斛D.?chrysotoxum標本和球花石斛D.?thyrsiflorum標本。
5.如權(quán)利要求3所述的利用如權(quán)利要求1所述分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法,其特征在于PCR反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5?min;94℃變性50?s,61℃退火50?s,72℃延伸1.5?min,35個循環(huán);最后于72℃下延伸10?min。
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