[發明專利]鑒別鼓槌石斛和球花石斛的分子特異性標記引物及方法

無效

• 申請號: 201410593364.5
• 申請日: 2014-10-29
• 公開（公告）號: CN104313162A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 王慧中;馮尚國;史鈺軍;何仁鋒;陳喆
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.?鑒別鼓槌石斛和球花石斛的分子特異性標記引物，其特征在于該引物核苷酸序列如下：

上游引物GCF：5’-CAAGCAGGGGCTAATGCTGCTGC-3’，如SEQ?ID?NO.1所示；

下游引物GCR：5’-ATGGATCGACGCATGGTTTGGGA-3’，如SEQ?ID?NO.2所示。

2.如權利要求1所述的分子特異性標記引物在鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum中的應用。

3.一種利用如權利要求1所述的分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法，其特征在于該方法是首先提取待測石斛標本基因組DNA作為模板，以分子特異性標記引物GCF/GCR作為擴增引物，進行PCR擴增，得到擴增產物；然后對擴增產物進行電泳檢測：若電泳結果出現582?bp的DNA條帶，則待測石斛樣本為鼓槌石斛D.?chrysotoxum；若電泳結果未出現582?bp的DNA條帶，則待測石斛樣本為球花石斛D.?thyrsiflorum。

4.如權利要求3所述的利用如權利要求1所述分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法，其特征在于所述的分子特異性標記引物GCF/GCR，其核苷酸序列如下：

上游引物GCF：5’-CAAGCAGGGGCTAATGCTGCTGC-3’，如SEQ?ID?NO.1所示；

下游引物GCR：5’-ATGGATCGACGCATGGTTTGGGA-3’，如SEQ?ID?NO.2所示如權利要求3所述的利用如權利要求1所述分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法，其特征在于該方法僅適用于待測標本為鼓槌石斛D.?chrysotoxum標本和球花石斛D.?thyrsiflorum標本。

5.如權利要求3所述的利用如權利要求1所述分子特異性標記引物進行鑒別鼓槌石斛D.?chrysotoxum和球花石斛D.?thyrsiflorum的方法，其特征在于PCR反應程序為：94℃預變性5?min；94℃變性50?s，61℃退火50?s，72℃延伸1.5?min，35個循環；最后于72℃下延伸10?min。