[發(fā)明專利]一種人工熊膽粉及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410588581.5
• 申請(qǐng)日: 2014-10-28
• 公開（公告）號(hào): CN104382941B
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王伯初;譚君;祝連彩;季慶治;婁德帥;徐英;張小利
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海凱寶藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K35/413
• 分類號(hào): A61K35/413;A61P27/02;A61P1/16;A61P29/00
• 代理公司: 上海科律專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)31290
• 代理人: 袁亞軍

1.一種人工熊膽粉的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

a)將禽畜膽粉用pH＝7～9的緩沖液溶解后進(jìn)行過(guò)濾，得到濾渣和濾液；

b)將所述濾液加入裝有7α-羥基類固醇脫氫酶、7β-羥基類固醇脫氫酶和輔酶I或輔酶II的反應(yīng)器中進(jìn)行反應(yīng)；所述7α-羥基類固醇脫氫酶、7β-羥基類固醇脫氫酶在反應(yīng)器中以固定化的方式存在；

c)將反應(yīng)完畢后的反應(yīng)液冷凍干燥后與所述濾渣混合，得到人工熊膽粉；

所述步驟a)包括如下過(guò)程：所述禽畜膽粉用pH＝7～9的緩沖液溶解后，11000g條件下離心10min后，多次過(guò)濾，得到濾渣和濾液，所述濾渣冷凍干燥保存；

所述步驟c)包括如下過(guò)程：將反應(yīng)完畢后的反應(yīng)液冷凍干燥48h后與所述濾渣混合均勻，得到人工熊膽粉；

所述禽畜膽粉的主要成分和質(zhì)量百分比如下：

總膽酸：40～65％

氨基酸：4～9％

微量元素：0.5～1％

其中，所述總膽酸中含有TCDCA，所述TCDCA占禽畜膽粉的質(zhì)量百分比為40～50％。

2.如權(quán)利要求1所述的人工熊膽粉的制備方法，其特征在于，所述步驟a)中的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液或甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液。

3.如權(quán)利要求1所述的人工熊膽粉的制備方法，其特征在于，所述步驟b)包括如下過(guò)程：所述濾液加入裝有7α-羥基類固醇脫氫酶、7β-羥基類固醇脫氫酶和輔酶I或輔酶II的反應(yīng)器里室溫反應(yīng)2～6h。

4.如權(quán)利要求1所述的人工熊膽粉的制備方法，其特征在于，所述禽畜膽粉為雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉、牛膽粉、兔膽粉、狗膽粉、羊膽粉中的一種或多種混合物。

5.如權(quán)利要求1所述的人工熊膽粉的制備方法，其特征在于，所述步驟b)包括如下酶固定化步驟：在1％的殼聚糖溶液中加入適量醋酸，制得殼聚糖醋酸溶液，將所述殼聚糖醋酸溶液注入到三聚磷酸鈉溶液中固化，得到殼聚糖球；將所述殼聚糖球放入盛有0.125％戊二醛水溶液的容器中活化，得到活化殼聚糖微球；稱取預(yù)定量的所述活化殼聚糖微球，裝入層析柱，加入適量的7α-羥基類固醇脫氫酶和7β-羥基類固醇脫氫酶液，采用垂直混合方式使之與微球結(jié)合，得到固定化酶。

6.如權(quán)利要求1所述的人工熊膽粉的制備方法，其特征在于，在所述含有固定化酶的反應(yīng)器中加入所述步驟a)中的濾液作為反應(yīng)底物溶液，加入預(yù)定量輔酶I或輔酶II，使輔酶I或輔酶II:TCDCA＝1:2～1:4(摩爾比)，在20～30℃下，反應(yīng)2～6h。

7.如權(quán)利要求1所述的人工熊膽粉的制備方法，其特征在于，所述7α-羥基類固醇脫氫酶和7β-羥基類固醇脫氫酶來(lái)源于撒丁島梭菌、脆弱擬桿菌或產(chǎn)氣柯林斯菌。

8.一種人工熊膽粉，其特征在于，由權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的制備方法制取；所述人工熊膽粉的主要成分和質(zhì)量百分含量如下：

總膽酸：40～65％

氨基酸：4～9％

微量元素：0.5～1％；

其中，所述總膽酸含有TUDCA和TCDCA，所述TUDCA占人工熊膽粉的質(zhì)量百分比為23～33％；所述TCDCA占人工熊膽粉的質(zhì)量百分比為12～30％。

9.如權(quán)利要求8所述的人工熊膽粉，其特征在于，所述TUDCA和TCDCA的質(zhì)量比為1～1.5。