[發(fā)明專利]一種檢測神經(jīng)纖維瘤病相關(guān)基因突變的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410587167.2
• 申請日: 2014-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN104450885A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉哲
• 申請（專利權(quán)）人: 百世諾（北京）醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)診斷和生物技術(shù)，涉及一種檢測神經(jīng)纖維瘤病相關(guān)基因突變的體外診斷試劑盒，是一種應(yīng)用于新一代測序平臺(tái)技術(shù)的一種神經(jīng)纖維瘤病相關(guān)基因突變的試劑盒。

技術(shù)背景

神經(jīng)纖維瘤病(Neurofibromatosis?1，NF1)由抑癌基因NF1突變所致，以多發(fā)性咖啡牛奶斑、腋窩或腹股溝斑點(diǎn)、多發(fā)性皮膚纖維瘤和虹膜Lisch結(jié)節(jié)為特征，較為嚴(yán)重的少見臨床表現(xiàn)還包括簇狀神經(jīng)纖維瘤、視神經(jīng)或其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤、惡性周圍神經(jīng)鞘瘤、脊柱側(cè)凸、脛骨發(fā)育不良和血管病變。

2.遺傳模式及流行病學(xué)

NF1呈常染色體顯性遺傳，外顯率高，患者在兒童期后基本上全部表現(xiàn)出臨床癥狀。NF1基因突變率高，約50％的患者由NF1基因新發(fā)突變所致。該病是最常見的常染色體顯性遺傳病之一，發(fā)病率約1/3000[1-2]。

3.臨床表現(xiàn)

NF1的臨床表現(xiàn)極具多樣性。許多患者可能僅表現(xiàn)為皮膚癥狀和Lisch結(jié)節(jié)，嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生率將隨年齡的增長而增加，并且許多臨床癥狀的顯現(xiàn)時(shí)間具有特征性。

幾乎所有患者均有多發(fā)性咖啡牛奶斑，通常出生時(shí)即存在。約50％的患者可見簇狀神經(jīng)纖維瘤，大部分發(fā)生于體內(nèi)，易被臨床忽視，癥狀性的簇狀神經(jīng)纖維瘤可引起畸形、累及功能甚至危及生命。視神經(jīng)膠質(zhì)瘤可導(dǎo)致失明和Lisch結(jié)節(jié)，癥狀性視神經(jīng)膠質(zhì)瘤通常在6歲前即表現(xiàn)為視力喪失或眼球突出。患者最嚴(yán)重的骨骼并發(fā)癥主要有脊柱側(cè)凸、脊柱發(fā)育不良、假性關(guān)節(jié)病和過度生長等。其他臨床表現(xiàn)還包括血管病變、高血壓、顱內(nèi)腫瘤、惡性周圍神經(jīng)鞘腫瘤等。至少50％的個(gè)體存在學(xué)習(xí)障礙。

參考文獻(xiàn)：

[1]Lammert?M，F(xiàn)riedman?JM，Kluwe?L，et?al.Prevalence?of?neurofibromatosis?1?in?German?children?at?elementary?school?enrollment.Arch?Dermatol.2005；141：71-74.

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對(duì)于神經(jīng)纖維瘤病的鑒別診斷傳統(tǒng)的方法主要依靠生化檢查和影像學(xué)檢查。這些手段存在很大的缺點(diǎn)：

1.檢查種類多；

2.靈敏度和特異度低；

3.易受藥物和精神狀況等因素的影響；

4.檢測時(shí)間要求苛刻；

基因診斷的優(yōu)勢在于：

1.方便，安全，快捷：僅抽取2-4毫升血；

2.任何時(shí)間都可以檢查；

3.不限制飲食，服藥，任何身體狀況都可以檢測；

4.相比反復(fù)，多項(xiàng)傳統(tǒng)檢查，更為經(jīng)濟(jì)；

5.發(fā)病前，疾病極早期診斷的唯一方式；

6.源頭確診，一次檢測，終身受益。

這一切都揭示了基因診斷在臨床上有巨大的應(yīng)用前景。

近年，大規(guī)模DNA平行測序平臺(tái)(massively?parallel?DNA?sequencing?platform)已經(jīng)發(fā)展為主流的測序技術(shù)，這項(xiàng)測序技術(shù)的出現(xiàn)不僅令DNA測序費(fèi)用降到了以前的百分之一，還讓基因組測序這項(xiàng)以前專屬于大型測序中心的“特權(quán)”能夠被眾多研究人員分享。

但是直接使用大規(guī)模DNA平行測序平臺(tái)檢測的成本目前仍然令個(gè)人難以承受。本發(fā)明可以同時(shí)把多個(gè)甚至幾十病人的神經(jīng)纖維瘤病相關(guān)基因精確的選擇性捕獲，然后用于大規(guī)模測序平臺(tái)，可以極大地降低基因診斷的成本，使之廣泛應(yīng)用于臨床成為可能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，提供一種檢測神經(jīng)纖維瘤病相關(guān)基因突變的目標(biāo)捕獲再測序的試劑盒。該試劑盒提高了基因捕獲的通量和基因平行測序的通量，操作簡便、成本低。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用捕獲目的NF1基因全部外顯子片段以及鄰近50bp的非編碼區(qū)的探針；用于擴(kuò)增待測片段的通用引物；測序接頭序列；緩沖液；dNTP；高保真聚合酶；鏈霉素磁珠。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種新的目標(biāo)捕獲再測序方法，包括以下步驟：

A.設(shè)計(jì)并制備用于捕獲神經(jīng)纖維瘤病相關(guān)基因突變的探針。并將這些探針結(jié)合在磁珠、薄膜或者玻片上。探針序列見序列表。