[發明專利]一種高特異性14個位點多個耳聾易感基因的多重PCR-LDR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410586158.1
• 申請日: 2014-10-28
• 公開（公告）號: CN104313159A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 步迅;張全芳;劉艷艷
• 申請（專利權）人: 步迅
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及DNA分子檢測技術領域，具體是一種14個耳聾易感基因的多重PCR-LDR檢測試劑盒。

背景技術

耳聾是一種嚴重影響人類生活質量的常見先天性疾病，它可以由單一基因突變或不同基因的復合突變引起，也可由環境因素(如醫療因素，環境暴露，創傷，藥物等)或基因和環境兩者共同作用而致。我國現有聽力殘疾人群2780萬，居各類殘疾之首(33％)。有研究發現GJB2、SLC26A4、線粒體基因是導致中國大部分非綜合征性耳聾的3個最常見的致病基因。

GJB2基因是第一個被克隆和鑒定的遺傳性耳聾致病基因，也是導致非綜合性耳聾最常見的致病基因。在非綜合征性耳聾中，約有20％是GJB2基因突變導致的。GJB2基因編碼的Cx26蛋白在耳蝸內呈高水平表達，與相鄰細胞的縫隙連接蛋白組成一個完整的縫隙連接通道。這些通道在信息傳遞和物質交換中起重要作用，是電解質、第二信使和代謝產物在細胞間轉換的重要通道。GJB2基因突變后，使鉀離子回流進入內淋巴的循環受到影響，導致感音神經性耳聾。GJB2基因最常見的突變類型是235de1C，其次是299-230delA＞T和176-191del16，其等位基因頻率分別為11.90％、2.22％和0.65％。病理性235delC突變導致移碼突變，產生無功能的蛋白質，使縫隙連接缺損，從而影響離子通道的正常開閉。299-300delAT突變導致Cx26多肽的CL區大部分缺失，TM3、EC2和TM4區完全缺失，可能喪失對縫隙連接通道pH值的調控，降低縫隙連接對異型蛋白的辨別能力。176-191del16指176位后16個堿基丟失，從59號密碼子開始移碼，使得終止密碼提前至75號，產生無功能的蛋白質。

間隙連接蛋白家族中GJB3是編碼間隙連接蛋白31(Cx31)，其功能主要以連接子復合體的形式融入膜間隙連接通道，參與細胞通訊。已有的耳聾群體分子流行病學資料表明，GJB3基因c.538C＞T點突變導致其編碼的Cx31蛋白的結構與功能發生變化，可以通過影響細胞間隙連接的形成，從而導致遺傳性耳聾的發生。

SLC26A4基因屬于離子轉運體26A家族(solute?carder?family26A。SLC26A)，編碼離子轉運相關蛋白。在機體離子成分平衡的維持中發揮重要作用。SLC26A4基因突變可導致常染色體隱性耳聾DFNB4和Pendred綜合征(前庭水管擴大或伴內耳畸形、神經性聾和甲狀腺腫)。SLC26A4基因最常見突變類型是IVS7-2A＞G，此外還包括2168A＞G，1226G＞A，1174A＞T，1975G＞C，2027T＞A等熱點突變。

WSF1基因定位于人類染色體的4p16上，其編碼產物是一種對糖苷內切酶敏感的膜糖蛋白，其功能與擔任細胞內、外離子轉運功能的微管網狀組織密切相關，直接影響內耳的生理功能。研究證明，WSF1基因的突變被證實是導致低頻感音神經性聽力損失的主要原因之一。主要表現為兩處突變：2158A＞G、2596G＞A，WFS1基因的突變雜合子可以引起常染色體顯性遺傳病低頻感音神經性聽力損失的突變雜合子可以引起常染色體顯性遺傳病低頻感音神經性聽力損失。

線粒體DNA突變是引起聽力損傷的重要原因之一。其中，線粒體12SrRNA基因突變與綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾相關，位于12SrRNA解碼區的1555A＞G和1494C＞T突變是造成氨基糖甙類抗生素耳毒性和非綜合征型耳聾常見的分子機制。這些突變可能造成12SrRNA二級結構的改變，破壞了線粒體蛋白的合成，降低細胞內ATP的產生，是細胞內外離子濃度失衡，耳蝸毛細胞凋亡，由此引起的線粒體功能障礙導致耳聾。

目前常用的基因突變檢測技術主要包括：直接測序技術、限制性片段長度多態性(RFLP)、DNA芯片技術(Micro?array)、變性高效液相色譜(DHPLC)、單鏈構象多態性(SSCP)和變性梯度凝膠電泳(DGGE)等。這些方法分別存在著成本高、準確率低、操作繁瑣和重復性差等問題。