[發明專利]一種耳聾易感基因突變檢測試劑盒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410583806.8
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN104263848A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 黃秋英;李慶閣;王旭東
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12M1/00
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

1.一種耳聾易感基因突變檢測試劑盒，其特征在于設有盒體、盒蓋、隔板、HHL?PCR混合液A瓶、HHL?PCR混合液B瓶、HHL?PCR混合液C瓶、HHL?PCR混合液D瓶、HHL酶混合液瓶、HHL標準對照瓶、HHL陰性對照瓶；HHL?PCR混合液A瓶中裝有HHL?PCR混合液A，HHL?PCR混合液B瓶中裝有HHL?PCR混合液B，HHL?PCR混合液C瓶中裝有HHL?PCR混合液C，HHL?PCR混合液D瓶中裝有HHL?PCR混合液D，HHL酶混合液瓶中裝有HHL酶混合液，HHL標準對照瓶中裝有HHL標準對照，HHL陰性對照瓶1中裝有HHL陰性對照，隔板設在盒體內，盒蓋與盒體連接，HHL?PCR混合液A瓶、HHL?PCR混合液B瓶、HHL?PCR混合液C瓶、HHL?PCR混合液D瓶、HHL酶混合液瓶、HHL標準對照瓶、HHL陰性對照瓶設在隔板上。

2.如權利要求1所述一種耳聾易感基因突變檢測試劑盒，其特征在于所述HHL?PCR混合液A包括1×PCR緩沖液，3.0mM?MgCl₂，dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP各0.2mM，0.04mM?GJB2基因擴增引物F1，0.04μM?GJB3基因擴增引物F2，0.4μM?GJB2基因擴增引物R1，0.4μM?GJB3基因擴增引物R2，0.2μM熒光探針P1，0.2μM熒光探針P2，0.2μM熒光探針P3，0.2μM熒光探針P4，0.2μM熒光探針P5；

所述HHL?PCR混合液B包括1×PCR緩沖液，3.0mM?MgCl₂，dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP各0.2mM，0.04mM用于擴增線粒體12S?rRNA基因的1494和1555位點的引物F3，0.04μM用于擴增線粒體12S?rRNA基因的961位點的引物F4，0.04μM用于擴增線粒體TS基因的7444和7445位點的引物F5，0.4μM用于擴增線粒體12S?rRNA基因的1494和1555位點的引物R3，0.4μM用于擴增線粒體12S?rRNA基因的961位點的引物R4，0.4μM用于擴增線粒體MT-TS基因的7444和7445位點的引物R5，0.2μM熒光探針P6，0.2μM熒光探針P7，0.2μM熒光探針P8，0.2μM熒光探針P9；

所述HHL?PCR混合液C包括1×PCR緩沖液，3.0mM?MgCl₂，dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP各0.2mM，0.04μM用于擴增SLC26A4基因的IVS7-2位點的引物F6，0.04μM用于擴增SLC26A4基因的2162和2168位點的引物F7，0.04μM用于擴增SLC26A4基因的1174、1226和1229位點的引物F8，0.4μM用于擴增SLC26A4基因的IVS7-2位點的引物R6，0.4μM用與擴增SLC26A4基因的2162和2168位點的引物R7，0.4μM用于擴增SLC26A4基因的1174、1226和1229位點的引物R8，0.2μM熒光探針P10，0.2μM熒光探針P11，0.2μM熒光探針P12，0.2μM熒光探針P13；

所述HHL?PCR混合液D包括1×PCR緩沖液，3.0mM?MgCl₂，dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP各0.2mM，0.04μM用于擴增SLC26A4基因的IVS15+5位點的引物F9，0.04μM用于擴增SLC26A4基因的1975和2027位點的引物F10，0.04μM用于擴增SLC26A4基因的749和754位點的引物R11，0.4μM用于擴增SLC26A4基因的IVS15+5位點的引物R9，0.4μM用于擴增SLC26A4基因的1975和2027位點的引物R10，0.4μM用于擴增SLC26A4基因的749和754位點的引物F11，0.2μM熒光探針P14，0.2μM熒光探針P15，0.2μM熒光探針P16，0.2μM熒光探針P17；所述HHL酶混合液包括5U/μL?Taq?DNA聚合酶、0.1U/μL?UNG酶；

所述HHL標準對照為正常人基因組DNA，即為野生型人基因組DNA；

所述HHL陰性對照不含目的基因片段，優選無菌水或Tris-HCl緩沖液。

3.如權利要求1所述一種耳聾易感基因突變檢測試劑盒，其特征在于各基因擴增引物的長度為15～40bp的寡核苷酸鏈，T_m為50～70℃。