[發明專利]一種菌絲生長活性測定方法

在審

• 申請號: 201410581044.8
• 申請日: 2014-10-27
• 公開（公告）號: CN105624259A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 申茂軍
• 申請（專利權）人: 申茂軍
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種菌絲生長活性測定方法，其特征在于包括以下步驟：

取一定量母液于PDA培養基中，充分混合，將混合好的培養基均勻倒入培養皿內冷凝即成帶毒培養基；待培養基冷卻凝固后，用接種針或消毒的鑷子將制備好的菌餅反面移植到帶毒培養基上；設陰性對照、空白對照和陽性對照；

液體懸浮培養在活性測定之前確定供試病原真菌在液體懸浮培養中的最佳收獲期，挑取新鮮菌絲于無菌馬鈴薯-葡萄糖-液體培養基中，同時含有相應的有機溶劑，搖床培養，，采用過濾法收集菌絲，烘干至恒重，求其平均值，在此基礎上繪制菌絲生長曲線，將供試樣品用合適的溶劑配成系列濃度的母液，然后取一定量于真菌培養液中；

用接種針將制備好的菌餅挑到混合好的帶毒PDB培養液中；然后搖床培養，待菌絲生長到最佳收獲期時，采用過濾法收集菌絲，烘干菌絲至恒重；實驗設陰性對照、空白對照和陽性對照。

2.根據權利要求1所述一種菌絲生長活性測定方法，其特征在于所述取一定量母液于PDA培養基中，充分混合，化合物在培養液中的濃度分別為：256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL和8μg/mL；將混合好的培養基均勻倒入培養皿內冷凝即成帶毒培養基；待培養基冷卻凝固后，用接種針或消毒的鑷子將制備好的菌餅反面移植到帶毒培養基上，1個培養皿中央接1個菌餅；設陰性對照、空白對照和陽性對照，每個處理重復3次。

3.根據權利要求2所述一種菌絲生長活性測定方法，其特征在于所述液體懸浮培養在活性測定之前確定3種供試病原真菌在液體懸浮培養中的最佳收獲期，挑取新鮮菌絲于無菌馬鈴薯-葡萄糖-液體培養基中，同時含有相應的1%的有機溶劑，搖床培養5-8天，每天取出3瓶，采用過濾法收集菌絲，于60°C下烘干至恒重，求其平均值，在此基礎上繪制菌絲生長曲線，將供試樣品用合適的溶劑配成系列濃度的母液：2.0mg/mL、1.5mg/mL、1.0mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL和0.0625mg/mL，然后取一定量于真菌培養液中，在培養液中的濃度分別為：20μg/mL、15μg/mL、10μg/mL、5.0μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL；

用接種針將制備好的菌餅挑到混合好的帶毒PDB培養液中，1個三角瓶中接種1個菌餅；然后搖床培養，待菌絲生長到最佳收獲期時，采用過濾法收集菌絲，于60°C下烘干菌絲至恒重；實驗設陰性對照、空白對照和陽性對照，每個處理重復3次。