[發(fā)明專(zhuān)利]一種靶向肽修飾的金納米顆粒及其制備方法和其作為四價(jià)鉑前體藥物載體的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410578811.X
• 申請(qǐng)日: 2014-10-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104667290A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉蕾;劉揚(yáng)中
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K47/42
• 分類(lèi)號(hào): A61K47/42;A61K9/14;A61K31/282;A61K33/24;A61P35/00
• 代理公司: 北京科迪生專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 11251
• 代理人: 楊學(xué)明;顧煒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤靶向和安全治療技術(shù)領(lǐng)域。具體地，涉及一種肝癌細(xì)胞靶向肽修飾的納米金顆粒，以及其制備方法和其在制備四價(jià)鉑前體藥物載體中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝細(xì)胞癌(簡(jiǎn)稱(chēng)肝癌)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，同時(shí)也是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，中國(guó)肝癌發(fā)病率占全球的45％，死亡率高居惡性腫瘤的第三位。肝癌起病隱匿，早期缺乏典型癥狀，進(jìn)展快，惡性程度高，預(yù)后差，絕大部分發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬于中晚期。肝細(xì)胞癌的治療主要以手術(shù)、化療和放療為主，但是化療藥物作用大多為非選擇性，體內(nèi)分布廣，治療劑量下對(duì)正常組織器官毒副作用大，包括胃腸道反應(yīng)、骨髓抑制作用、腎毒性和藥物耐受性降低等；據(jù)統(tǒng)計(jì)，95％以上的肝癌患者治療失敗。

順鉑(Cisplatin，CDDP)是一個(gè)含鉑的抗腫瘤藥物，即順式-二氯二氨合鉑(II)，屬于細(xì)胞周期非特異性藥物，對(duì)肉瘤、惡性上皮腫瘤、淋巴瘤及生殖細(xì)胞腫瘤都有治療功效。它是一大類(lèi)鉑類(lèi)藥物中最早被合成的一個(gè)，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單且作用機(jī)理明確。但是順鉑的副作用很多，包括：腎臟毒性、惡心、嘔吐，神經(jīng)毒性、耳毒性、禿頭癥以及電解質(zhì)紊亂；同時(shí)順鉑使用的時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，大部分病人都會(huì)對(duì)順鉑產(chǎn)生抗性，從而疾病復(fù)發(fā)；尋找新的方法用于改進(jìn)順鉑的治療是很有必要的。

四價(jià)鉑化合物作為順鉑的前藥，具有水溶性好、毒性低、口服利用度高等優(yōu)點(diǎn)，在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性，并對(duì)順鉑耐藥細(xì)胞仍然保持較好的活性。同時(shí)，四價(jià)鉑化合物在藥物修飾和藥物運(yùn)輸體系設(shè)計(jì)中具有極大的優(yōu)勢(shì)。

納米金顆粒具有低毒、生物相容性高并且易于修飾化學(xué)基團(tuán)等優(yōu)點(diǎn)，可安全的應(yīng)用于人類(lèi)腫瘤治療。研究表明，由于納米金的尺寸較小，腫瘤組織提高了對(duì)它的通透性，使得納米金顆粒靜脈注射后會(huì)在腫瘤部位聚集。

根據(jù)文獻(xiàn)1(自然綜述·癌癥——Nature?Reviews?Cancer，2005，5:161-171)報(bào)道，腫瘤組織附近的血管內(nèi)皮與正常的血管內(nèi)皮相比具有較高的通透性，因而金納米顆粒可以滲透到腫瘤組織中，再由細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入腫瘤細(xì)胞中。將藥物裝載到納米顆粒表面，即可達(dá)到運(yùn)輸藥物的目的。棒狀的金納米顆粒在近紅外波段具有較高的光吸收截面和優(yōu)良的光熱轉(zhuǎn)換效率，研究表明，納米金棒以及相關(guān)的納米結(jié)構(gòu)可以通過(guò)光熱療法，在較小的光照劑量下殺死癌細(xì)胞，而不會(huì)破壞周?chē)募?xì)胞，因而，納米金顆粒具有藥物載體的功能。

SP94序列是一個(gè)靶向肝癌細(xì)胞的多肽。它是由體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)發(fā)現(xiàn)的多肽，并且對(duì)多種肝癌細(xì)胞表現(xiàn)出了選擇性結(jié)合，而對(duì)于正常細(xì)胞(正常肝細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等)只有少量結(jié)合。在移植了人類(lèi)肝癌細(xì)胞的聯(lián)合免疫缺陷的小鼠實(shí)驗(yàn)中，SP94會(huì)選擇性與肝癌組織結(jié)合而非內(nèi)臟器官；良好的選擇性使SP94可以成為一種實(shí)用的肝細(xì)胞癌靶向配體。

靶向肽修飾的納米金顆粒可以顯著提高其生物兼容性，增加對(duì)癌細(xì)胞的選擇性，降低毒副作用。現(xiàn)有技術(shù)中將多肽修飾到納米金顆粒表面的方法有兩種，一種是通過(guò)鏈接劑將多肽修飾到納米金顆粒表面，例如文獻(xiàn)2(Langmuir,2001,17(20):6368-74)使用聚乙二醇(PEG)修飾納米金顆粒后可以與多肽結(jié)合。第二種是通過(guò)形成金硫鍵直接將多肽修飾在納米金顆粒表面，例如文獻(xiàn)3(Bioconjugate?Chemistry,2012,23(7):1494-501)所用的(GCGC)序列。

因此，開(kāi)發(fā)一種具有肝癌細(xì)胞靶向作用的納米金顆粒作為藥物載體將鉑類(lèi)藥物運(yùn)輸?shù)侥[瘤細(xì)胞內(nèi)部，對(duì)腫瘤的化療很有幫助，目前這類(lèi)技術(shù)較多，但是用肝癌細(xì)胞靶向肽SP94修飾的金納米顆粒，至今尚未見(jiàn)到過(guò)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用作為運(yùn)載鉑類(lèi)藥物的肝癌細(xì)胞靶向肽修飾的金納米顆粒的藥物載體及其制備方法，以提高金納米顆粒的對(duì)肝癌細(xì)胞的選擇性，減小其對(duì)正常細(xì)胞的非特異性結(jié)合并可控釋放鉑類(lèi)藥物。同時(shí)提供該肝癌細(xì)胞靶向肽修飾的納米金顆粒在制備藥物載體中的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

一種肝癌細(xì)胞靶向肽修飾的金納米顆粒，所述靶向肽修飾的金納米顆粒對(duì)肝癌細(xì)胞具有選擇性。

根據(jù)所述的一種肝癌細(xì)胞靶向肽修飾的金納米顆粒，其中所述的靶向肽含有14-20個(gè)氨基酸，其中包含具有肝癌細(xì)胞靶向作用的SFSIIHTPILPL即SP94序列，所述的肽序列中含有1-3個(gè)半胱氨酸殘基。

根據(jù)所述的一種肝癌細(xì)胞靶向肽修飾的金納米顆粒，所述的肝癌細(xì)胞靶向肽修飾的金納米顆粒是通過(guò)肽分子中的巰基與金形成金硫共價(jià)鍵將肽連接到金納米顆粒的表面。