[發明專利]一種檢測大腸桿菌的電化學傳感器及其制備方法

有效

• 申請號: 201410576627.1
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN104407132A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 黃加棟;郭玉娜;王玉;劉素;崔敏;李杰;徐偉;王虹智;許穎;崔杰;邱婷婷
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 劉麗

1.一種檢測大腸桿菌的電化學傳感器，其特征在于從內到外依次為電極、普魯士藍-碳納米管-納米金復合物層、大腸桿菌抗體層、牛血清白蛋白封閉層。

2.根據權利要求1所述的電化學傳感器，其特征在于普魯士藍-碳納米管-納米金復合物層厚度為90±5nm，大腸桿菌抗體層厚度為120±10nm，牛血清白蛋白封閉層厚度為100±10nm。

3.根據權利要求1所述的電化學傳感器，其特征在于普魯士藍-碳納米管-納米金復合物層是通過以下步驟得到的：

（1）?多壁碳納米管進行羧基化；

（2）制備納米金；

（3）使用步驟（1）和（2）得到的產物制備普魯士藍-碳納米管-納米金復合物。

4.根據權利要求3所述的電化學傳感器，其特征在于普魯士藍-碳納米管-納米金復合物中普魯士藍：碳納米管：金質量比為2:2:1。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的電化學傳感器，其特征在于

（1）電化學傳感器用磷酸緩沖液沖洗之后，在E.coli溶液中孵育，再次用PBS沖洗，干燥后在大腸桿菌菌液中孵育完全，干燥后滴加HRP標記的大腸桿菌抗體，HRP標記的抗體通過與目標物之間的強識別能力，被修飾在電極表面；

（2）采用三電極系統，以Ag/AgCl為參比電極，以Pt電極為對電極，修飾電極為工作電極，以含對苯二酚和雙氧水的PBS為工作底液采用差分脈沖伏安法檢測，電位設置為-0.2到0.6?V，脈沖寬度0.05V，脈沖寬度掃描為0.06?S，進行檢測。

6.一種權利要求1-5中任一項所述的電化學傳感器的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）制備普魯士藍-碳納米管-納米金復合物，滴加到經過處理的電極表面，室溫干燥，得到普魯士藍-碳納米管-納米金復合物層；

（2）在普魯士藍-碳納米管-納米金復合物層上滴加無標記的大腸桿菌抗體，干燥，得到大腸桿菌抗體層；

（3）在大腸桿菌抗體層外包覆牛血清白蛋白，得到牛血清白蛋白封閉層。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于普魯士藍-碳納米管-納米金復合物的制備方法如下：

1）多壁碳納米管羧基化，

2)制備納米金，

3)?制備普魯士藍-碳納米管-納米金復合物。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于多壁碳納米管羧基化是通過以下步驟得到的：

?稱取200?mg的多壁碳納米管，加入160.0?mL的濃硫酸和濃硝酸的混合液中，其中濃硫酸和濃硝酸的體積比為3：1，混合均勻，離心，離心后倒去上清液加入去離子水水洗，繼續離心，直到上清液呈中性，干燥即得。

9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于普魯士藍-碳納米管-納米金復合物是通過以下步驟得到的：

(1)?4?mg羧基化的多壁碳納米管分散到40.0?mL?0.01?M?的FeCl₃溶液中；

(２)邊攪拌邊將40.0?mL?0.01?M的K₃Fe（CN）₆溶液逐滴加入步驟（1）得到的FeCl₃溶液中；

(3)?將步驟（2）得到的溶液在10000?r/min條件下不斷離心，倒去上清液，直到上清液呈無色；

(4)?沉淀物經收集、干燥，分散到質量分數為0.1?%的4.0?mL殼聚糖水溶液中，得到修飾PB-CNTs的氨基基團；

(5)?在10000?r/min條件下離心去除剩余殼聚糖；

(6)?將已完成氨基修飾的PB-CNTs加入金膠體中攪拌2均勻，離心分離即得。

10.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于牛血清白蛋白的濃度為0.1%。