[發明專利]蛋白質表面重建

在審

• 申請號: 201410575610.4
• 申請日: 2007-06-01
• 公開（公告）號: CN104356230A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 大衛·R·劉;凱文·約翰·菲利普斯;邁克爾·S·勞倫斯
• 申請（專利權）人: 哈佛大學校長及研究員協會
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K19/00;C07K14/435;C07K14/36;C12N15/12;C12N15/31;C12N9/10;C12N15/54;A61K38/17;A61K38/16;A61K38/45
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司 11287
• 代理人: 林斯凱

1.一種野生型蛋白的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體包括與野生型序列相比經修飾的一級氨基酸序列，導致所述超帶電蛋白質變體上的凈電荷為：

生理pH值下-10至-40，其中所述超帶電蛋白質變體在生理pH值下所帶凈電荷比野生型蛋白減小了至少-3；或

生理pH值下+10至+52，其中所述超帶電蛋白質變體在生理pH值下所帶凈電荷比野生型蛋白增加了至少+3；

其中所述經修飾的一級氨基酸序列包括用在生理pH值下帶正電或帶負電的天然氨基酸殘基置換多個非保守表面殘基；以及

其中所述非保守表面殘基通過比較所述蛋白質的氨基酸序列與來自同一蛋白質家族或來自不同物種的蛋白質的至少一個其它氨基酸序列來鑒定，其中如果在特定位置上有小于或等于50％的氨基酸序列為相同的氨基酸序列，那么殘基就是非保守的。

2.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述變體帶正電。

3.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述變體帶負電。

4.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體在生理pH值下所帶凈電荷比野生型蛋白增加了至少+4、至少+5、至少+10、至少+15、至少+20、至少+25、至少+30、或至少+35。

5.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體在生理pH值下所帶凈電荷比野生型蛋白減小了至少-4、至少-5、至少-10、至少-15、至少-20、至少-25、至少-30、或至少-35。

6.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體在生理pH值下的凈電荷在-40至-20或-40至-30范圍內。

7.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體在生理pH值下的凈電荷在+52至+20、+52至+30、或+52至+40范圍內。

8.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體保留野生型蛋白的至少50％、至少75％、至少90％、或至少95％的活性。

9.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述野生型蛋白是免疫球蛋白或其片段。

10.如權利要求9所述的超帶電蛋白質變體，其中所述免疫球蛋白或其片段是人類的或是人源化的。

11.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述變體是融合蛋白。

12.如權利要求11所述的超帶電蛋白質變體，其中所述融合蛋白包括連接子。

13.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體的經修飾的一級氨基酸序列包括用不同殘基置換野生型蛋白的至少一個帶電的非保守表面殘基。

14.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體的經修飾的一級氨基酸序列包括用不同電荷的殘基置換野生型蛋白的至少一個非保守表面殘基。

15.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體的經修飾的一級氨基酸序列包括用賴氨酸、組氨酸或精氨酸殘基置換野生型蛋白的至少一個非保守表面殘基。

16.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體的經修飾的一級氨基酸序列包括用天冬氨酸或谷氨酸殘基置換野生型蛋白的至少一個非保守表面殘基。

17.如權利要求1所述的超帶電蛋白質變體，其中所述超帶電蛋白質變體的經修飾的一級氨基酸序列包括用不同殘基置換野生型蛋白的至少2個、至少5個、至少10個、至少20個或至少30個非保守表面殘基。