[發明專利]一種核基質蛋白22化學發光免疫檢檢測劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201410573982.3
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN104267197A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 張華;廖鐘財
• 申請（專利權）人: 浙江東方基因生物制品有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N33/535
• 代理公司: 湖州金衛知識產權代理事務所(普通合伙) 33232
• 代理人: 裴金華

技術領域

發明涉及免疫分析醫學領域，具體地，本發明提供了一種核基質蛋白22（NMP22）化學發光免疫檢檢測劑盒及其制備方法。

背景技術

膀胱腫瘤是泌尿系統最常見的腫瘤，90%以上為移行細胞癌，其中80﹪以上是無浸潤的淺表性癌，10%-20%發展為浸潤性膀胱癌。膀胱移行細胞癌（transitional?cell?carcinoma?of?bladder）是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，多發生于50-70歲之間。這種疾病死亡率高，及早地發現、診斷對治療和預后有重要作用。有資料表明在疾病早期診斷出的患者的5年存活率大于90%，而在晚期診斷出的患者其5年存活率僅約為15%-30%。目前對膀胱癌診斷和術后復查主要靠膀胱鏡和尿細胞學檢查，前者雖準確，但是一種侵入性檢查，操作復雜、費時費力、費用高額，且給病人帶來很大痛苦，使得很多病人對此方法有抵觸情緒，同時難以發現原位癌或扁平癌；尿細胞學檢查雖無創，且特異性較好，但敏感性低，對于分期較低、分化較好的腫瘤，其敏感性僅為30%或更低，而且受診斷醫師主觀因素的影響較大。膀胱鏡和尿細胞學檢查的局限性限制了對膀胱癌診斷的應用，故尋找一種簡便、無創且能早期診斷膀胱癌的檢測方法及設備具有很大意義。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供了一種簡便、無創且能早期診斷膀胱癌的使用化學發光免疫檢測核基質蛋白22（NMP22）試劑盒及其制備方法。

本發明的目的之一是提供一種使用化學發光免疫檢測核基質蛋白22試劑盒。

核基質蛋白22化學發光免疫檢檢測劑盒包括NMP22校準品、NMP22單克隆抗體預包被的固相載體、NMP22單克隆抗體的酶標記物、與所述酶作用的化學發光底物液、以及濃縮洗液。

優選，所述的固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。

優選，所述的酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。

優選，所述的發光底物為1，2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾或異魯米諾。

優選，所述的1，2-二氧乙烷類衍生物為（金剛烷）-1，2-二氧乙烷、3-（2′-螺旋金剛烷）-4-甲氧基-4-（3〞-磷酰氧基）苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。

優選，所述的濃縮洗液為Tris-HCl或PBST洗滌液。

本發明還提供一種制備上述試劑盒的方法，包括以下步驟：

1)配制核基質蛋白22的校準品；

2)以酶標記核基質蛋白22單克隆抗體；

3)以核基質蛋白22單克隆抗體包被固相載體；

4)配制上述酶所作用的發光底物液；

5)配制濃縮洗液；

6)分裝所述核基質蛋白22的校準品、酶標記的核基質蛋白22單克隆抗體、酶作用的發光底物液和濃縮洗液，并將各組分裝成成品。

優選，所述步驟3）包被固相載體包括以下步驟：

1)包被

采用檸檬酸緩沖液與核基質蛋白22（NMP22）單克隆抗體混合配制成包被液，并將所得混合液負載于固相載體上；

2)用生理鹽水洗滌步驟1）所得載體；

3)封閉

配制封閉液，pH為7.0-7.5，然后將所得的封閉液負載于步驟2）洗滌后的載體上。

更優選，所述封閉液選用PBS緩沖液。

或更優選，所述發光底物液包含24g?Tris、160g?NaCl、4g?KCl、15ml?HCl、200ml?3-（2′-螺旋金剛烷）-4-甲氧基-4-（3〞-磷酰氧基）苯基-1，2-二氧乙烷、1ml?Proclin?300、1000ml雙蒸水。

優選，所述的固相載體為微孔板、塑料珠、塑料管或磁性顆粒。

優選，所述的酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。

優選，所述的發光底物為1，2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾或異魯米諾。

更優選，所述的1，2-二氧乙烷類衍生物為（金剛烷）-1，2-二氧乙烷、3-（2′-螺旋金剛烷）-4-甲氧基-4-（3〞-磷酰氧基）苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。

優選，所述的濃縮洗液為Tris-HCl或PBST洗滌液。

???綜上所述，本發明的有益效果為：