[發(fā)明專利]一種高特異性的利巴韋林人工抗原的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410573952.2
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN104387431A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 匡華;彭雙;胥傳來;徐麗廣;馬偉;劉麗強;宋珊珊;吳曉玲
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C07H19/056
• 分類號: C07H19/056;C07H1/00;C07K14/765;C07K14/795;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種利巴韋林半抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式Ⅱ所示

（式Ⅱ），

其是由利巴韋林為原料，在利巴韋林分子的5-號位羥基一端接出活性羧基，得到單一特異性結(jié)構(gòu)的利巴韋林羧基衍生物，該衍生物為利巴韋林半抗原。

2.一種利巴韋林完全抗原，其特征在于：是權(quán)利要求1所述利巴韋林半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利巴韋林完全抗原，其特征在于：所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、匙孔血藍(lán)蛋白KLH、血藍(lán)蛋白LPH、雞卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HAS中的一種。

4.權(quán)利要求1所述的利巴韋林半抗原的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：100mg利巴韋林溶解于5mL無水DMF和5mL無水吡啶的混合液中，加入50mg琥珀酸酐后，60℃水浴反應(yīng)12h，最后于pH為3，0℃條件下重結(jié)晶生成利巴韋林半抗原。

5.權(quán)利要求2所述的利巴韋林完全抗原的制備方法，其特征在于：將利巴韋林半抗原上的羧基與載體蛋白上的氨基進(jìn)行偶聯(lián)，得到利巴韋林完全抗原，步驟如下：

（1）將利巴韋林半抗原，用超純水溶解，與NHS，EDC按摩爾比為1:?2:?2混合，在室溫25℃下攪拌反應(yīng)12h進(jìn)行活化；取牛血清蛋白，利巴韋林半抗原與牛血清蛋白的摩爾比為80:1，用0.1M?pH9.6?碳酸鹽緩沖液溶解，其中溶解后的蛋白濃度大于3mg/mL；將活化的利巴韋林半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，室溫下反應(yīng)24h，用PBS緩沖液透析2天，期間換水4次，即得到利巴韋林完全抗原；

或（2）將利巴韋林半抗原，用超純水溶解，0℃預(yù)冷30min，0℃下與三正丁胺,?氯甲酸異丁酯按摩爾比為1:?1.5:?1.5混合,??0℃反應(yīng)1h進(jìn)行活化；取牛血清蛋白，利巴韋林半抗原與牛血清蛋白的摩爾比為60:1，用?0.1M?pH9.6?碳酸鹽緩沖液溶解，0℃預(yù)冷30min，其中溶解后的蛋白濃度大于3mg/mL；在0℃條件下，將活化的利巴韋林半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，0℃條件下反應(yīng)1h，然后室溫下反應(yīng)24h；用PBS緩沖液透析2天，期間換水4次，即得到利巴韋林完全抗原。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于：所述載體蛋白牛血清白蛋白BSA被替換為匙孔血藍(lán)蛋白KLH、血藍(lán)蛋白LPH、雞卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HAS之一種。

7.權(quán)利要求2所述利巴韋林完全抗原的應(yīng)用，其特征在于在制備利巴韋林抗體中的應(yīng)用，免疫動物得到抗體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利巴韋林完全抗原的應(yīng)用，其特征在于：所述抗體為多克隆抗體和/或單克隆抗體。

9.權(quán)利要求8所述抗體在檢測利巴韋林中的應(yīng)用。