[發(fā)明專利]一種制備培西加南的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410573721.1
• 申請(qǐng)日: 2014-10-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104356221B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈柯;劉霽莉;周亮;楊東暉;路楊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州阿諾生物醫(yī)藥科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及多肽合成技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種制備培西加南的方法。本發(fā)明的具體步驟為：A）通過(guò)液相法合成二肽片段Fmoc?Lys(Boc)?Lys(Boc)?OH；B）采用固相合成法，以氨基樹(shù)脂為起始樹(shù)脂，按照培西加南主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，其中7、8位，10、11位和21、22位氨基酸偶聯(lián)采用二肽片段Fmoc?Lys(Boc)?Lys(Boc)?OH偶聯(lián)；C）肽樹(shù)脂裂解，純化，凍干后得到培西加南。本發(fā)明提供了一種合成效率高、成本低、同時(shí)還能避免兩個(gè)賴氨酸偶聯(lián)不完全產(chǎn)生的缺失肽雜質(zhì)，適合規(guī)模化生產(chǎn)的培西加南的合成工藝。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多肽類抗生素的制備方法，特別涉及一種制備培西加南的方法。

背景技術(shù)

培西加南，英名為：pexiganan，是含有22個(gè)氨基酸的線性多肽，肽序列為：

培西加南是葛蘭素史克公司和Genaera公司(原Magainin Pharmaceuticals公司)聯(lián)合開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品。它作為一種廣譜的局用抗菌劑，用于治療糖尿病足部潰瘍的感染。培西加南最初是從爪蟾的腹部皮膚分離來(lái)的，為動(dòng)物源的多肽類抗菌藥物，是多肽類抗生素族magainin的一員，也是近20年來(lái)第2種新的抗生素族，能有效地對(duì)抗3000多種分離菌株，包括細(xì)菌(革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌和厭氧菌)、變形蟲(chóng)、真菌和寄生蟲(chóng)。培西加南作用機(jī)制不同于其它的抗生素，主要通過(guò)攻擊微生物的細(xì)胞膜來(lái)殺菌，而大多數(shù)其它的抗生素則是使細(xì)菌關(guān)鍵蛋白失去功能。因此，有望成為新一代的抗菌劑。

由于爪蟾的正常細(xì)胞組織中含量有限，直接獲得培西加南非常困難。CN200510014833和WO2011069280均報(bào)道了培西加南的基因工程的生產(chǎn)方法，采用基因工程技術(shù)制備抗菌肽，由于存在在于發(fā)酵表達(dá)量少，收率低，生產(chǎn)成本高的缺點(diǎn)，因此不利于工業(yè)化大生產(chǎn)。目前，多肽的合成主要還是運(yùn)用固相多肽合成法制備，WO2011069280還報(bào)道了培西加南的類似物的多肽固相逐步偶聯(lián)合成方法，此方法合成步驟較多，合成周期長(zhǎng)，純度和收率不高，特別在偶聯(lián)兩個(gè)賴氨酸時(shí)難以避免產(chǎn)生缺失肽雜質(zhì)，因此也不適合規(guī)模化生產(chǎn)。

綜上所述，現(xiàn)有培西加南的制備過(guò)程中，合成步驟較多，合成周期長(zhǎng)，效率低，純度和收率不高，特別在偶聯(lián)兩個(gè)賴氨酸時(shí)難以避免產(chǎn)生缺失肽雜質(zhì)，不適合規(guī)模化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明人用現(xiàn)有的合成方法，制備培西加南，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)存在的技術(shù)問(wèn)題是：合成步驟較多，合成周期長(zhǎng)，效率低，純度和收率不高，特別在偶聯(lián)兩個(gè)賴氨酸時(shí)難以避免產(chǎn)生缺失肽雜質(zhì)，不適合規(guī)模化生產(chǎn)。為此，本發(fā)明人對(duì)培西加南的合成方法進(jìn)行了研究，從而得到了本發(fā)明的技術(shù)方案。

本發(fā)明的目的是提供一種制備培西加南的方法。本發(fā)明的合成路線如圖1所示：首先通過(guò)液相法合成二肽片段Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH；其次采用固相合成法，以氨基樹(shù)脂為起始樹(shù)脂，按照培西加南主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，其中7、8位，10、11位和21、22位氨基酸偶聯(lián)采用二肽片段Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH偶聯(lián)；肽樹(shù)脂裂解，純化，凍干后得到培西加南。

本發(fā)明中一些常用的縮寫(xiě)具有以下含義；

Fmoc ：芴甲氧羰基

Fmoc-AA ：芴甲氧羰基保護(hù)的氨基酸

DIC ：N,N′-二異丙基碳化二亞胺

DCC ：N,N′-二環(huán)己基碳二亞胺

PyBOP ：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷

HATU ：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯

HOBt ：1- 羥基苯駢三唑