[發明專利]一種丹參多酚酸提取物指紋圖譜及有關成分的含量測定方法

有效

• 申請號: 201410572435.3
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN105588885B
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 佟玲;徐靜瑤;劉小琳;岳洪水;鞠愛春
• 申請（專利權）人: 天津天士力之驕藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N27/64
• 代理公司: 11130 北京華科聯合專利事務所(普通合伙)
• 代理人: 王為

本發明涉及一種丹參多酚酸提取物指紋圖譜的建立及有關成分的含量測定方法，包括如下步驟：步驟1：采用超高效液相多波長可見紫外檢測法，建立丹參多酚酸提取物數字化定量指紋圖譜；步驟2：利用質譜對步驟1中指紋圖譜中的峰進行指認，確定紫外檢測共有的指紋峰；步驟3：采用高效液相色譜可變波長檢測法對步驟2中指認出的三個含量較大、活性比較明顯且結構明確的指標性成分含量進行測定。

技術領域：

本發明涉及一種中藥提取物的檢測方法，特別涉及一種丹參多酚酸提取物指紋圖譜的建立及有關成分的含量測定方法

背景技術：

丹參為唇形科鼠尾草屬植物。又名：紫丹參、紅根、血參、大紅袍等。丹參以根供藥用，味苦，性微寒。具有活血調經、祛瘀生新、鎮靜安神、涼血消癰、消腫止痛等功能。用于治療月經不調、痛經、產后瘀阻腹痛、關節酸痛、神經衰弱失眠、心悸、癰腫瘡毒等癥。近代醫學臨床證明，丹參有擴張血管與增進冠狀動脈血流量的作用，用來治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心動過速等癥，有顯著的療效；還用來治療慢性肝炎、早期肝硬變等癥，亦有良好的效果。

丹參中含有兩類主要有效成分，即脂溶性丹參酮類和水溶性丹參酚酸類。現代醫學認為，丹參酚酸類(salvianolie acids)成分，能夠縮小心肌梗死的范圍，減輕其病情，對大鼠心肌缺血、再灌注損傷具有保護作用，同時有明顯的抑制血小板聚集、抗凝、溶纖及降低血脂、抗動脈粥樣硬化的作用，具有較大的臨床藥用價值。該類化合物主要有丹酚酸、丹參素、原兒茶醛、咖啡酸等，其中丹酚酸B是丹參水溶性成分中的主要藥效成分。

丹參多酚酸注射劑是一種已經上市的產品，其活性物質被稱為“丹參多酚酸”。丹參多酚酸的提取制備方法有多種，例如：取丹參飲片，用純化水煎煮提取三次，每次0.5～1小時，將三次提取液合并，冷卻，用鹽酸溶液調節至酸性，放置4～8小時，過濾，得澄明藥液，將藥液用聚酰胺柱層析工藝純化，上樣后用純化水沖洗，以碳酸氫鈉溶液進行洗脫，收集洗脫液，將洗脫液用鹽酸溶液調節至酸性，采用大孔樹脂柱層析工藝純化藥液，上樣后用純化水沖洗，以乙醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮回收乙醇，所得濃縮液冷藏12～24小時后過濾，濾液用氫氧化鈉溶液調節pH值至5.3～6.0，冷凍干燥，即得。之后 再將丹參多酚酸提取物與輔料進行混合制備成各種制劑。例如，與甘露醇溶液進行混合，并調pH至5.5～6.0，定容后冷凍干燥，制備丹參多酚酸注射劑。

作為丹參多酚酸注射劑的活性成分，目前丹參多酚酸提取物和制劑的質量標準現狀來看，質控項目很不全面，普遍采用紫外-可見分光光度法來測定多酚酸的含量。該法是以丹酚酸B為對照計算多酚酸的含量，專屬性和準確度差。且對于成分復雜的中藥制劑，僅以一種成分控制含量指標，在缺乏整體性的同時，對于復雜成分的指認也并不充足。

因此，針對上述復雜成分指認不充分以及定量不準確等缺陷。本發明開發了UPLC色譜指紋圖譜的方法，利用液質進行峰指認，從而確定了23個紫外檢測共有的指紋峰。并且同時對于指認出的三個含量較大、活性比較明顯且結構明確的指標性成分建立了HPLC含量測定方法。

本發明是以全面表征中藥制劑的質量為目標，提供了一種采用UPLC-PDA法(超高效液相多波長可見紫外檢測法)，建立了丹參多酚酸提取物的數字化定量指紋圖譜，并以二級系統指紋定量法鑒定了多批丹參多酚酸提取物樣品的一致性與穩定性，共檢出化學成分39個，結合多級質譜信息及對照品，鑒定丹參酚酸類化合物23個。考慮到UPLC應用到大規模檢測的成本及HPLC的廣泛應用性，又以HPLC-VWD法(高效液相色譜可變波長檢測法)同時測定三個指標性成分迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量。在確保準確性、有效性的同時，又兼顧了成本節約原則，更適合應用于擴大化生產，完善了現有的注射用丹參多酚酸的質控標準。

發明內容：

本發明提供一種丹參多酚酸提取物指紋圖譜及含量測定方法，其特征在于，步驟如下：

步驟1：采用超高效液相多波長可見紫外檢測法，建立丹參多酚酸提取物數字化定量指紋圖譜；