[發明專利]一種丹參多酚酸提取物指紋圖譜及有關成分的含量測定方法

有效

• 申請號: 201410572435.3
• 申請日: 2014-10-24
• 公開（公告）號: CN105588885B
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 佟玲;徐靜瑤;劉小琳;岳洪水;鞠愛春
• 申請（專利權）人: 天津天士力之驕藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N27/64
• 代理公司: 11130 北京華科聯合專利事務所(普通合伙)
• 代理人: 王為

1.一種丹參多酚酸提取物指紋圖譜及含量測定方法，其特征在于，步驟如下：

步驟1：采用超高效液相多波長可見紫外檢測法，建立丹參多酚酸提取物數字化定量指紋圖譜；

步驟2：利用質譜對步驟1中指紋圖譜中的峰進行指認，確定紫外檢測共有的指紋峰；

步驟3：采用高效液相色譜可變波長檢測法對步驟2中指認出的三個含量較大、活性比較明顯且結構明確的指標性成分含量進行測定；

其中，步驟1的具體步驟如下：

(1)對照品溶液的制備：精密稱定對照品丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B，加超純水溶解，定容至丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM終濃度分別為200-500μg/ml，迷迭香酸、紫草酸終濃度分別為300-600μg/mL，丹酚酸B終濃度為500-1500μg/mL，即得；

(2)供試品溶液的制備：分別精密稱定10-50批丹參多酚酸提取物，樣品溶于超純水，溶解后過濾，稀釋成濃度為1mg/mL-5mg/mL的溶液；

(3)指紋圖譜的測定：精密吸取供試品溶液1-5μL，注入超高效液相色譜儀，記錄色譜圖，即得；

其中，色譜條件如下：

色譜柱：UPLC C18柱；

流動相：溶劑A：水，含0.1％-0.5％甲酸；溶劑B：乙腈，含1％-5％甲醇；

梯度洗脫：

0-3min,12-18％B；3-15min,18％B；15-17min,18-20％B；17-25min,20％B；25-28min,20-23％B；28-35min,23％B；35-40min,23-40％B；40-45min,40-95％B；45-50min,95％B；

溫度：30-40℃；

流速：0.2-0.3ml/min；

色譜圖光譜采集范圍：190～400nm；

其中，步驟3的具體步驟如下：

(1)供試品溶液制備：取丹參多酚酸提取物，精密稱定，加初始流動相溶解并定容至終濃度為0.6-1.2mg/mL，搖勻，即得；

(2)混合對照品溶液制備：分別精密稱取迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B對照品各適量，加初始流動相制成混合對照品溶液，得迷迭香酸質量濃度為100-150μg/mL，紫草酸質量濃度為100-150μg/mL，丹酚酸B質量濃度為1.0-2.5mg/mL的混合對照品溶液；

(3)精密吸取供試品溶液1-5μL，注入高效液相色譜儀，采用外標峰面積法，同時測定供試品溶液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量；

其中，色譜條件如下：

色譜柱：HPLC C18柱；

流動相：A相：水，含0.3％～0.6％的甲酸；B相：乙腈，含2％～4％的甲醇和0.3％～0.6％的甲酸；

梯度洗脫：0～40min，20％B；40～50min，20-70％B；

流速：0.9-1.1mL/min；

柱溫：30℃-35℃；

檢測波長：288nm；

其中，步驟(1)、(2)中所述初始流動相，是指80％A流動相和20％B流動相的混合溶液。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1中，

色譜柱優選：UPLC C18柱；

流動相優選：

溶劑A：水，含0.2％甲酸；溶劑B：乙腈，含3％甲醇；或

溶劑A：水，含0.1％甲酸；溶劑B：乙腈，含2％甲醇。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中的質譜條件如下：

四級桿-飛行時間質譜采用(-)-ESI離子源，霧化氣為高純氮氣，碰撞氣為高純氦氣；

掃描范圍：m/z100-1200；

碰撞能量：6eV；

MSE梯度裂解能：20-40eV。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3中，

流動相優選：

A相：水，含0.5％的甲酸；B相：乙腈，含2％的甲醇和0.5％的甲酸；或

A相：水，含0.3％的甲酸；B相：乙腈，含3％的甲醇和0.3％的甲酸；

流速優選1mL/min；

柱溫優選30℃。