[發明專利]檢測硫酸基轉移酶活性的雜合型化合物及其應用

有效

• 申請號: 201410572319.1
• 申請日: 2014-10-23
• 公開（公告）號: CN104387436A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 陳玲;王小麗;繆冶煉
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學;繆冶煉
• 主分類號: C07J43/00
• 分類號: C07J43/00;G01N33/573
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;唐循文

技術領域

本發明屬于硫酸基轉移酶活性檢測領域，具體涉及一種檢測硫酸基轉移酶活性的雜合型化合物及其應用。

背景技術

硫酸基轉移酶(sulfotransferase，SULT)家族是一類主要負責催化硫酰基(SO3-)從供體3磷酸腺苷一5磷酸硫酸鹽(PAPS)轉移到廣泛存在的含有羥基(hydroxyl)或氨基(amine)基團的化合物，從而形成硫酸鹽(sulfates)或磺胺鹽(sulfmates)，使底物發生硫酸化代謝，也被稱為硫酸化(Sulfation)。

人類SULT基因家族主要有SULT1，SULT2，SULT4和SULT6，在類固醇分泌器官、肝、血液和激素依賴型組織(激素反應性器官，如胎盤、前列腺、皮膚和乳腺等)中高表達。催化雌激素硫酸化的主要有酚類固醇(SULT1)亞家族，包括SULT1E1，SULT1A1和SULT1B1(如圖1A所示)，其中SULTIE1編碼的蛋白質與雌二醇(E2)、雌酮(E1)的親和力最強。羥基類固醇硫酸基轉移酶(家族成員SULT2A1和SULT2B1)主要催化雄酮、孕烯醇酮、脫氫表雄酮等羥基類固醇的硫酸化。SULT2A1可催化雌激素、甲狀腺激素、外源性激素、藥物的硫酸化。此外，SULT2B1b能催化25-羥化膽固醇(25HC)硫酸化反應，主要產物為3-硫酸-25-羥化膽固醇(25HC3S)(如圖1B所示)。

目前已有的主要檢測手段僅能分析SULT1E1的表達水平，并不能準確地反映硫酸基轉移酶對酶底物的硫酸化能力。(1)SULT1E1蛋白水平的檢測試劑盒(人雌激素硫酸轉移酶重組蛋白的C末端融合了一個6個氨基酸的His標簽，該蛋白最終由標準的色譜技術純化出)；(2)用SULT1E1抗體進行免疫組織染色，反映SULT1E1的表達量；(3)用Western?blot的方法，檢測SULT1E1的蛋白水平；(4)用實時定量RT-PCR的方法，檢測細胞中SULT1E1的mRNA水平。

此外，本申請人已申請的檢測雌激素硫酸基轉移酶活性(專利申請號：201310366700.8)技術方案：用H³標記-雌激素(H³–E2)作為反應底物，PAPSS提供硫酸基團，添加血漿樣品作為SULT1E1的供體；反應后產生17β-雌二醇-3硫酸鹽結合體(H³–E2-S)用液體閃爍計數儀進行檢測標記E2的放射性濃度來分析硫酸基轉移酶活性。

目前國內外檢測雌激素、雄激素、甲狀腺激素的技術僅限于報告總的激素水平，包括有活性功能的激素、被代謝和降解的無功能活性激素二部分。因此迫切需要開拓一種新技術方案能區分活性激素或無活性激素的水平。

發明內容

解決的技術問題：本發明的目的在于提供一種檢測硫酸基轉移酶活性的雜合型化合物及其應用，利用該化合物可以簡單便捷且準確度高的檢測硫酸基轉移酶活性。

技術方案：檢測硫酸基轉移酶(sulfotransferase，SULT)活性的雜合型化合物，分子通式如(I)所示：X-L-H(I)；H為激素或羥化膽固醇部分；X為能被抗體識別的小分子基團；L為能使X部分與H部分基團連接的連接部分。

所述H為雌激素/雌酮(E2/E1)、甲狀腺激素(T4/T3)、睪酮(T)、孕烯醇酮(PREG)、脫氫表雄酮(DHEA)、外源性激素或25-羥化膽固醇(25HC)。