[發明專利]一種犬干擾素α融合蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410568273.6
• 申請日: 2014-10-22
• 公開（公告）號: CN104388452A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 楊芳;黃靜;潘盈盈;譚士明;嚴文娟;陳亞州;吳自榮
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;A61K38/21;A61P31/12;C12N15/70
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.編碼犬干擾素α融合蛋白的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列具有如SEQ?ID?No：1所示之序列。

2.如權利要求1所述之核酸序列，其特征在于，所述之核酸序列包含位于N端的NusA核酸序列和位于C端的犬干擾素α核酸序列，所述NusA核酸序列與所述犬干擾素α核酸序列之間由EcoR?I酶切序列連接。

3.如權利要求1所述之核酸序列，其特征在于，所述之犬干擾素α核酸序列是針對大腸桿菌表達系統密碼子偏好性優化過的核酸序列；所述之犬干擾素α核酸序列具有如SEQ?ID?No：3所示之序列。

4.一種犬干擾素α融合蛋白，其特征在于，所述犬干擾素α融合蛋白包含一NusA蛋白和一犬干擾素α；編碼所述犬干擾素α融合蛋白的核酸序列如SEQ?ID?No：1所示。

5.如權利要求3所述的犬干擾素α融合蛋白，其特征在于，所述犬干擾素α融合蛋白包含位于氮端的大腸桿菌NusA蛋白和位于碳端的犬干擾素α蛋白，所述NusA蛋白與所述犬干擾素α蛋白之間由雙肽Glu-Phe連接。

6.如權利要求3所述的犬干擾素α融合蛋白，其特征在于，所述犬干擾素α融合蛋白具有如SEQ?ID?No：5所示之序列。

7.如權利要求3所述的犬干擾素α融合蛋白，其特征在于，所述犬干擾素α融合蛋白為可溶性蛋白。

8.如權利要求3所述的犬干擾素α融合蛋白，其特征在于，所述犬干擾素α融合蛋白不需要酶切即具有抗病毒活性。

9.如權利要求3所述的犬干擾素α融合蛋白，其特征在于，所述犬干擾素α融合蛋白具有高穩定性。

10.如權利要求3所述的犬干擾素α融合蛋白在制備犬抗病毒藥物中的應用。

11.一種利用犬干擾素α融合蛋白抑制犬病毒活性的方法，其中，所述犬干擾素α融合蛋白為如權利要求3所述的無需酶切即具有抗病毒活性的可溶性蛋白。

12.一種犬干擾素α融合蛋白的制備方法，其特征在于，其步驟包括，將犬干擾素α的DNA序列按照大腸桿菌表達系統的密碼子偏愛性優化密碼子，通過克隆技術連接到表達NusA蛋白的載體pET44a中，形成編碼犬干擾素α融合蛋白的重組質粒，再將該質粒轉化進大腸桿菌BL21表達系統中，經誘導表達而產生犬干擾素α融合蛋白；當誘導溫度為18℃-25℃時，所表達的犬干擾素α融合蛋白為可溶性表達；經過鎳離子親和層析純化，透析除鹽，得到如權利要求3所述的犬干擾素α融合蛋白。

13.如權利要求12所述的制備方法，其特征在于，所述犬干擾素α融合蛋白為不需要酶切即具有抗病毒活性的可溶性蛋白。