[發明專利]一種包含CXCR3 抗體的碳納米管光聲造影劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201410563540.0
• 申請日: 2014-10-21
• 公開（公告）號: CN105582552A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 劉穎斌;譚慶剛;陸巍;談竹君;張一鑒;王許安;曹陽;張飛;李懷峰
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬新華醫院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;沈利

技術領域

本發明涉及生物領域，特別涉及一種包含CXCR3抗體的碳納米管光聲造影劑及其制備方法。

背景技術

光聲成像是近年來發展起來的一種新型生物醫學成像方法。當脈沖激光照射到生物組織中時，組織的光吸收域將產生光聲信號，生物組織的光聲信號攜帶了組織的光吸收特征信息，通過測量光聲信號能重建出組織中的光吸收分布圖象。光聲成像結合了純光學成像高對比度特性和純超聲成像高穿透深度特性的優點，從原理上避開了光散射的影響，突破了高分辨率光學成像深度“軟極限”(～1mm)，可實現50mm的深層活體內分子成像。由于腫瘤組織和正常組織對光吸收的差異(在近紅外激光的照射下，癌變組織和周圍正常組織的光吸收差異至少5倍以上)和不同生理狀態的生物組織對光的吸收不同，利用光聲成像就可以反映了組織的結構特征，同時還可能反映組織的代謝狀態、病變特征、甚至神經活動。因此，光聲成像必將帶來生物醫學影像領域的一次革新。

碳納米管(CNTs)獨特的分子結構決定了它具有優異的力學、熱學、光學以及電磁性能，近年來，碳納米管在生物醫學方向的潛在應用逐漸成為新的熱點。CNTs在近紅外光區能產生強烈的熒光，可以在復雜的生物體環境中被檢測，但是要求碳管本身結構完整，同時需要呈單分散，這就在一定程度上限制了其應用，而且純的碳納米管在生物體有一定的毒性。

CXCR3蛋白在正常組織/細胞，原位膽囊癌組織/細胞及膽囊癌轉移組織/細胞中的表達水平依次遞增，且與臨床預后密切相關，CXCR3在高轉移潛能的膽囊癌細胞及膽囊癌轉移灶中高表達，其在在多種腫瘤細胞中也表現出表達異常，并且其可能在腫瘤細胞的發生、演進、異質化、增殖、細胞周期、侵襲轉移及耐藥性等惡性生物學行為方面扮演重要角色

發明內容

本發明要解決的技術問題是為了克服現有的碳納米管材料分散度不高，對生物體具有一定毒性的缺點，提供了一種包含CXCR3抗體的碳納米管光聲造影劑及其制備方法。

因此，本發明是通過下述技術方案來解決上述技術問題：

本發明采取的技術方案之一為：一種包含CXCR3抗體的碳納米管光聲造影劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

(1)將氯金酸溶液與多胺基陽離子聚合物溶液混合避光攪拌0.5-1.5小時，之后于85℃-95℃保持0.5-1.5小時，制得納米金溶液；

(2)伴隨超聲、攪拌，將羧基化多壁碳納米管溶液逐滴加入步驟(1)所得的納米金溶液中，滴加完成后超聲20-30分鐘，攪拌30-60分鐘使之充分混合，之后在55℃-65℃保持20-36小時，制得納米金-支化聚乙烯亞胺-碳納米管溶液，在所得納米金-支化聚乙烯亞胺-碳納米管溶液中逐滴加入巰基化聚乙二醇溶液，超聲攪拌45-50小時，制得巰基化聚乙二醇-納米金-支化聚乙烯亞胺-碳納米管溶液；

(3)在步驟(2)所得的巰基化聚乙二醇-納米金-支化聚乙烯亞胺-碳納米管溶液中加入氯金酸溶液攪拌0.5-1.小時，攪拌完畢后逐滴加入硼氫化鈉溶液，充分反應之后加入2-(N-嗎啉代)乙磺酸緩沖液，攪拌20-30分鐘，N-羥基琥珀酸亞胺溶液，攪拌15-20分鐘，充分混合后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亞胺鹽酸鹽溶液，反應20-30分鐘，加入CXCR3抗體溶液，2-3小時后離心，將所得下層溶液干燥即得。

步驟(1)為：將氯金酸溶液與多胺基陽離子聚合物溶液混合避光攪拌0.5-1.5小時，之后于85℃-95℃保持0.5-1.5小時，制得納米金溶液。本發明所述多胺基陽離子聚合物為本領域常規的多胺基陽離子聚合物，較佳地為支化聚乙烯亞胺(Branched-PEI)、支化聚丙烯酰胺(PAM)、四乙烯五胺(TEPA)或三乙烯四胺(TETA)，更佳地為支化聚乙烯亞胺，其分子量為Mn10000-Mn1800。所述多胺基陽離子聚合物的制備方法為本領域常規制備方，或市售可得。其中步驟(1)所述攪拌的速度為常規，較佳地為150rpm。攪拌的溫度為85℃-95℃，較佳地為90℃。攪拌的時間為0.5-1.5小時，較佳地為1小時。其中所述氯金酸溶液的濃度較佳地為0.1-0.4mg/mL，更佳地為0.2mg/mL，所述多胺基陽離子聚合物溶液的濃度較佳地為5-20mg/mL，更佳地為10mg/mL。其中所述加熱的方式為本領域常規加熱方式，較佳地為油浴加熱。其中所述多胺基化合物和氯金酸的質量比較佳地為50:1-300:1，更佳地為200:1，其中所得納米金溶液中的納米金顆粒平均直徑為5-30nm，更佳地為10nm。