[發明專利]NDM?1 鎖核酸探針修飾電極及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410557136.2
• 申請日: 2014-10-20
• 公開（公告）號: CN104237353B
• 公開（公告）日: 2016-11-23
• 發明（設計）人: 張立群;王云霞;府偉靈
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N27/327
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.NDM-1鎖核酸探針修飾的電極，其特征在于，所述電極是在金電極表面固定5’端修飾巰基的NDM-1LNA探針，最后用巰基乙醇封閉非特異性吸附位點而得。

2.根據權利要求1所述NDM-1LNA探針修飾的電極，其特征在于：所述5’端修飾巰基的NDM-1鎖核酸探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.權利要求1或2所述NDM-1LNA探針修飾電極的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

a.將金電極打磨，拋光，清潔，干燥，得清潔的金電極，備用；

b.向步驟a所得清潔的金電極表面滴加含5’端修飾巰基的NDM-1LNA探針溶液，修飾完成后用巰基己醇溶液封閉，超純水清洗得NDM-1LNA探針修飾電極。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟a是將金電極分別用0.3μm、0.05μm的Al₂O₃粉末打磨拋光，每次打磨后用超純水洗凈，再分別于硝酸、丙酮和超純水中各超聲洗滌，干燥，備用。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟b是向步驟a所得清潔的金電極表面滴加5’端修飾巰基的NDM-1LNA探針，濃度為0.5～2.5μM的溶液，修飾后用濃度為1mmol/L的巰基己醇溶液封閉，清洗得NDM-1LNA探針修飾電極。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述5’端修飾巰基的NDM-1LNA探針的濃度為1.5μM，所述鎖核酸的濃度為1.5μM。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：5’端修飾巰基的NDM-1LNA探針固定的條件為37℃下恒溫1小時。

8.檢測NDM-1的電化學生物傳感器，其特征在于：包括工作電極、對電極、參比電極和測試底液；所述工作電極為權利要求1或2所述NDM-1LNA探針修飾電極，所述對電極為鉑電極，所述參比電極為飽和甘汞電極，所述為測試底液為pH7.4的含2mmol/LK₃Fe(CN)₆-K₄Fe(CN)₆和5mmol/L?KCl的PBS溶液。

9.權利要求1～2任一項所述NDM-1LNA探針修飾電極或權利要求8所述檢測NDM-1的電化學生物傳感器在檢測NDM-1基因中的應用。

10.利用權利要求8所述檢測NDM-1的電化學生物傳感器檢測NDM-1基因的方法，其特征在于，包括如下步驟：將NDM-1LNA探針修飾電極與樣品溶液雜交后，然后以NDM-1LNA探針修飾電極為工作電極，鉑電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，pH7.4的含2mmol/LK₃Fe(CN)₆-K₄Fe(CN)₆和5mmol/L?KCl的PBS溶液為測試底液構建電化學生物傳感器，采用循環伏安法進行掃描測定，電位掃描范圍為-0.3V～0.7V，電位掃描速率為50mv/s，根據雜交前后峰電流變化檢測NDM-1基因。