[發(fā)明專利]一種鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)米爾貝霉素的方法及其發(fā)酵培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410556183.5
• 申請日: 2014-10-20
• 公開（公告）號: CN105087710A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設計）人: 徐海斌;朱廷恒;李春
• 申請（專利權）人: 杭州辰西生物科技有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12R1/46
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)米爾貝霉素的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

（1）斜面活化培養(yǎng)：取保存的菌種，接種到斜面培養(yǎng)基，接菌后置于28℃的培養(yǎng)箱中，相對濕度40-60%，培養(yǎng)8-9d，得到活化菌種；

（2）種子擴大培養(yǎng)：從斜面培養(yǎng)基取種，用無菌接種環(huán)在無菌條件下從斜面培養(yǎng)基上刮下孢子制成孢子懸液，使其濃度為10⁷-10⁸個孢子/mL，然后取孢子懸液接種到種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)速220r/min，培養(yǎng)時間46-48h，得到種子液；

（3）發(fā)酵培養(yǎng)：將所得種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)速220r/min下進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)時間150-180h；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分比計的原料混合制成：蔗糖12-13%，棉籽餅粉0.8-1.2%，花生餅粉0.8-1.2%，脫脂奶粉0.8-1.2%，番茄醬2-2.5%，磷酸氫二鉀0.1-0.15%，大豆生物炭粉0.1-0.2%，硫酸亞鐵0.01-0.015%，沸石粉0.38-0.42%，鉬酸鈉0.004-0.006%，硫酸銅0.004-0.006%，碳酸鈣0.28-0.32%，水余量，pH7.2-7.6。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述斜面培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分比計的原料混合制成：蔗糖0.3%，脫脂奶粉0.1%，酵母抽提物0.15%，麥芽提取物0.4%，瓊脂2.5%，水余量，pH7.2±0.1。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述種子培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分比計的原料混合制成：蔗糖1.5%，蛋白胨0.35%，酵母抽提物0.5%，脫脂奶粉0.2%，磷酸氫二鉀0.05%，消沫劑GPE0.04%，水余量，pH7.0-7.4。

4.根據(jù)權利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：步驟（3）中種子液接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5-15%。

5.根據(jù)權利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：所述大豆生物炭粉的制備方法為：將大豆在400-600℃低溫下裂解5-10小時，冷卻，粉碎至400-800目。

6.一種鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)米爾貝霉素用發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下質(zhì)量百分比計的原料混合制成：蔗糖12-13%，棉籽餅粉0.8-1.2%，花生餅粉0.8-1.2%，脫脂奶粉0.8-1.2%，番茄醬2-2.5%，磷酸氫二鉀0.1-0.15%，大豆生物炭粉0.1-0.2%，硫酸亞鐵0.01-0.015%，沸石粉0.38-0.42%，鉬酸鈉0.004-0.006%，硫酸銅0.004-0.006%，碳酸鈣0.28-0.32%，水余量。

7.根據(jù)權利要求6所述的一種鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)米爾貝霉素用發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于：所述大豆生物炭粉的制備方法為：將大豆在400-600℃低溫下裂解5-10小時，冷卻，粉碎至400-800目。

8.根據(jù)權利要求6所述的一種鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)米爾貝霉素用發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH控制為7.2-7.6。