[發(fā)明專利]整合全血核酸提取、擴(kuò)增即可視化檢測(cè)腫瘤基因突變的微流控芯片及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410554594.0
• 申請(qǐng)日: 2014-10-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104312913A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 關(guān)明;汪驊;張心菊;吳之源;許笑;劉維薇;周丹秋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34;C12M1/33;C12M1/12;C12M1/00;C12Q1/68
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種整合全血核酸提取、擴(kuò)增即可視化檢測(cè)腫瘤基因突變的微流控芯片，其特征在于，包括細(xì)胞裂解室和細(xì)胞液濾過(guò)單元；所述細(xì)胞裂解室設(shè)有樣品加入口和液體流出口；

其中，所述細(xì)胞液濾過(guò)單元的上游連通所述細(xì)胞裂解室的液體流出口，所述細(xì)胞液濾過(guò)單元的下游連通至基因擴(kuò)增及檢測(cè)池；所述上游和下游之間設(shè)有過(guò)濾器，所述過(guò)濾器的濾孔孔徑為25-35μm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述細(xì)胞液濾過(guò)單元與基因擴(kuò)增及檢測(cè)池之間設(shè)有可閉合的通道。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的微流控芯片，其特征在于，所述閉合通道為螺絲閥。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述細(xì)胞裂解室中，從所述樣品加入口處，至液體流出口之間，設(shè)有曲線形樣品流動(dòng)通道。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微流控芯片，其特征在于，所述樣品流動(dòng)通道長(zhǎng)度至少為20cm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述過(guò)濾器由多層濾網(wǎng)和/或多層填料組成。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，還包括擴(kuò)增引物。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，還包括顯色劑。

9.一種檢測(cè)基因突變的方法，其特征在于，包括：

將全血樣品注射至一細(xì)胞裂解室，在所述細(xì)胞裂解室內(nèi)裂解；

所述裂解室連通至細(xì)胞液濾過(guò)單元，所述濾過(guò)單元中設(shè)有過(guò)濾器，所述過(guò)濾器的濾孔孔徑為25-35μm；裂解液通過(guò)所述過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾；

在所述細(xì)胞液濾過(guò)單元下游連接有擴(kuò)增及檢測(cè)池，擴(kuò)增及檢測(cè)池內(nèi)包被有擴(kuò)增引物，過(guò)濾后的液體進(jìn)入所述擴(kuò)增及檢測(cè)池，加入顯色劑，進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；通過(guò)顏色判斷是否存在基因突變。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述基因突變?yōu)镴AK2V617F基因突變，所述顯色劑為鈣黃綠素，所述擴(kuò)增引物至少包括如下序列：

GCATCTTTATTATGGCAGAGAG；

TGCTCTGAGAAAGGCATTA；

GTCTCCACTGGAGTATGTTTCTGTGGAGAC；

TGGAGTATGTGTCTGTGGAGAC；

GTCTCCACTGGAGTATGTGTCTGTGGAGAC；

TGGAGTATGTTTCTGTGGAGAC；

GCTGCTTCAAAGAAAGACTAAGGAAATGGACAACAGTCAAACAAC；

GCTTTCTCACAAGCATTTGGTTTTAAATTAGCCTGTAGTTTTACTTACTCTC。