[發(fā)明專利]一種過敏原陽性血清的純化制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410553626.5
• 申請(qǐng)日: 2014-10-17
• 公開（公告）號(hào): CN104977401A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王洪;李慶春;孫嬋;夏波;秦楓;錢林;王秀偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州浩歐博生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛(wèi);汪青

1.?一種過敏原陽性血清的純化制備方法，包括用過敏原對(duì)健康動(dòng)物進(jìn)行免疫、采血后獲得抗血清的步驟和對(duì)所述的抗血清進(jìn)行純化獲得陽性血清的步驟，其特征在于：所述的純化的具體方法為：

對(duì)所述的抗血清進(jìn)行親和純化得到IgG抗體；將所述的IgG抗體和人IgE?Fc按質(zhì)量比為1:1～2偶聯(lián)后，經(jīng)分離純化獲得IgG-IgE?Fc連接物濃溶液，將所述的IgG-IgE?Fc連接物濃溶液稀釋至濃度為0.5～1μg/ml，即得所述的陽性血清。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：采用瓊脂糖親和介質(zhì)或者采用免疫親和層析柱進(jìn)行所述的親和純化。

3.?根據(jù)權(quán)利要求2所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：所述的瓊脂糖親和介質(zhì)為Protein-A?sepharose?CL-4B。

4.?根據(jù)權(quán)利要求2所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：所述的免疫親和層析柱為所述的過敏原與瓊脂糖凝膠連接成的親和層析柱。

5.?根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：所述的抗血清先經(jīng)過硫酸銨處理后，再采用所述的免疫親和層析柱進(jìn)行所述的親和純化。

6.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：所述的人IgE?Fc是將人源IgE溶解木瓜蛋白酶消化液中，再用木瓜蛋白酶消化，再用碘乙酰胺終止消化反應(yīng)后，用瓊脂糖親和介質(zhì)提取獲得的。

7.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：所述的IgG抗體和所述的人IgE?Fc通過2-亞胺四氫噻吩偶聯(lián)劑或4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯偶聯(lián)劑活化后，在pH?7.2～7.4的條件下進(jìn)行所述的偶聯(lián)。

8.?根據(jù)權(quán)利要求7所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：所述的2-亞胺四氫噻吩偶聯(lián)劑的濃度為9～11?mg/ml，所述的4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯偶聯(lián)劑的濃度為4～6?mg/ml。

9.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：采用Sephadex?200凝膠純化柱進(jìn)行所述的分離純化。

10.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的過敏原陽性血清的純化制備方法，其特征在于：采用含質(zhì)量比為0.4～0.6%的牛血清白蛋白、pH?7.5～8.5、0.09～0.11mol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液將所述的IgG-IgE?Fc連接物濃溶液進(jìn)行所述的稀釋。