[發明專利]一種檢測養殖廢物中雌激素的方法有效

申請號：	201410550857.0	申請日：	2014-10-16
公開（公告）號：	CN105572238B	公開（公告）日：	2017-11-10
發明（設計）人：	陸雋鶴;宦志榮;孔德洋	申請（專利權）人：	無錫市寰創環境科技發展有限公司
主分類號：	G01N30/02	分類號：	G01N30/02;G01N30/08
代理公司：	南京天華專利代理有限責任公司32218	代理人：	徐冬濤,尹慧晶
地址：	214200 江蘇***	國省代碼：	江蘇;32
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	一種檢測養殖廢物雌激素方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明屬于環境分析技術領域，具體涉及一種檢測養殖廢物中雌激素的方法。

背景技術

環境激素污染被認為繼臭氧層破壞、溫室效應之后的第三大全球性重大環境問題。環境激素定義為對生物的正常行為及生殖、發育相關的正常激素的合成、儲存、分泌、體內輸送、結合及清除等過程產生妨礙作用的物質。環境激素的被認為是導致男性精子數量減少、精子畸形，女性不孕不育現象的主要因素，也和成人類免疫系統功能下降，內分泌異常，惡性腫瘤增多，神經系統出現障礙，新生兒畸形，發育不全等疾病逐年上升密切相關。同時，環境激素能夠影響野生動物的內分泌系統、免疫系統和神經系統，從而對生態系統造成威脅。環境激素污染和人類活動密切相關。生活污水和養殖廢棄物被認為是環境激素的主要來源。目前最受關注的激素主要是雌激素，包括雌二醇，炔雌醇，雌酮，雙酚A等。生活污水和養殖廢棄物的排放是它們進入環境的主要途徑。

隨著對環境激素危害的認識，建立高效、可靠的分析方法迫在眉睫。環境激素污染的特點是：第一，分布廣泛，在各種介質，包括水體、土壤、生物樣品中均可能存在；第二，濃度低，通常在ng/L水平，但由于激素自身的特點，即使在這樣的低濃度，也能產生顯著的生物效應。目前，雌激素的分析主要通過高效液相色譜-串聯質譜檢測(HPLC/MS/MS)技術，普通液相色譜-紫外檢測(HPLC/DAD)的靈敏度難以滿足要求。相對于普通的HPLC/DAD的廣泛應用，HPLC/MS/MS屬于高端精密儀器，成本高，對操作人員的要求也高，一般分析實驗室不具備。除此之外，HPLC/MS/MS分析對樣品前處理有很高的要求。對于水樣，首先要經過固相萃取(SPE)富集，然后要進行復雜的凈化處理，才可以進HPLC/MS/MS分析。凈化的目的是盡可能去除樣品中的各種雜質，否則會對質譜分析產生嚴重干擾，影響結果準確性。總之，環境激素的定量分析步驟繁瑣、耗時，對人員和儀器要求很高，經濟成本也很高。

水中環境激素的分析方法已經相對成熟。養殖廢棄物的排放和還田是環境中激素的主要來源之一。相對于水樣，養殖廢棄物的成分要復雜的多，尤其含有一定量的油脂。雌激素親水性不強，用水提取回收率很低，因此必須用有機溶劑，但何種溶劑合適，目前還不清楚。此外，有機溶劑在提取激素的過程中，會同時把樣品中的油脂提取出來。油脂進入無論對后面的高效液相色譜分離，還是質譜分析，都是致命的。以上種種因素，對于養殖廢棄物中的激素物質，目前還沒有可靠的提取、分析方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種養殖固體廢棄物(如養雞場、養豬場包括糞便、絨毛、食物殘渣等)中雌二醇，炔雌醇，雌酮，雙酚A等雌激素的定量分析方法，該方法能夠有效克服樣品中各種雜質的干擾，同時成本相對低廉，適合大批量樣品的分析。

本發明的目的是通過以下方式實現的：

一種檢測養殖廢物中雌激素的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

(1)樣品萃取：取養殖場固體廢物3-10g，以體積比為2:1-4:1的二氯甲烷和甲醇的混合溶液為溶劑，在超聲輔助下萃取，合并萃取液，離心，取上清液，用氮氣吹溶劑使之揮發，直至剩余溶液1-2mL；

(2)樣品凈化：取硅膠2-5g，用正己烷活化，裝入徑高比為1：10-15的玻璃柱中，靜置，待固體沉降完全，排放正己烷，使其液面和硅膠柱齊平，制備得到凈化小柱；玻璃柱徑高比優選為1：10；

將步驟(1)得到的樣品用正己烷溶解，再上載到凈化小柱，用正己烷清洗，然后用氮氣將硅膠柱吹干；

(3)樣品洗脫：用乙腈洗脫，收集洗脫液，濃縮至1-2ml；

(4)樣品測定：用高效液相色譜-熒光檢測器進行定量分析，熒光檢測器的激發波長和發射波長分別為280nm和310nm。

該方法中二氯甲烷和甲醇的混合溶液體的積比優選為2:1。

上述方法步驟(1)中所述的萃取條件為萃取2-3次，每次萃取5-15分鐘。

上述方法步驟(2)所用的硅膠粒徑為過80-100目篩。所述的玻璃柱優選直徑1cm，柱長10-15cm。