[發明專利]一種利用熱榨花生粕制備葡萄糖苷酶抑制活性肽的方法

在審

• 申請號: 201410547450.2
• 申請日: 2014-10-16
• 公開（公告）號: CN104342475A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 齊宏濤
• 申請（專利權）人: 青島博之源生物技術有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

技術領域

本發明涉及利用熱榨花生粕制備葡萄糖苷酶抑制活性肽的方法，屬于食品天然活性產物加工領域。

背景技術

花生（Arachis?hypogaea?L.）又稱香果、地果、落花生，為豆科植物花生的種子，是世界上主要的油料資源之一。花生的蛋白質含量為25～36%，花生蛋白含有人體必需的八種氨基酸，精氨酸含量高于其它堅果，生物學效價高于大豆。目前，中國對花生的利用多在食用油脂方面，花生果提取油脂后產生大量的副產物花生粕，每年產量達400萬噸，是一種大宗蛋白質資源。花生粕中的蛋白質經蛋白酶水解后可得到活性短肽，具有清除自由基、金屬離子螯合、抑制脂質過氧化等抗氧化作用，以及抑制α-葡萄糖苷酶活性和降血糖作用。

葡萄糖苷酶抑制活性肽是一種淡黃色或乳白色、略帶花生香氣的粉末狀固體，易溶于水。該產品具有較好的清除自由基、抑制α-葡萄糖苷酶活性以及降血糖作用。葡萄糖苷酶抑制活性肽競爭性抑制位于小腸的各種α-葡萄糖苷酶，使淀粉類分解為葡萄糖的速度減慢，從而減緩腸道內葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖。α-葡萄糖苷酶抑制活性肽不刺激β細胞分泌胰島素，但可降低餐后胰島素水平，說明可增加胰島素的敏感性。葡萄糖苷酶抑制活性肽可以作為延緩腸道碳水化合物吸收而達到治療糖尿病的輔助降糖藥物；也可添加到飲料、面制品、肉制品中作為天然抗氧化劑，防止脂肪氧化，改善食品品質以及減少合成食品添加劑使用量。

目前，獲得生物活性蛋白肽途徑有三種：（1）從天然生物體提取，提取成本高，不能大規模生產。（2）水解蛋白產生，酸法水解蛋白，氨基酸受損嚴重，水解難控制而較少應用；酶解法可大量生產生物活性肽，水解條件溫和，若結合微波、超聲輔助酶解法可大大縮短反應時間，降低生物活性肽的生產成本，具有廣闊的發展前景。（3）化學合成、酶法合成或重組DNA技術合成，化學合成法成本高、副反應物及殘留化合物對人體有害，其發展受到制約；酶法合成反應周期長，產率低不能滿足工業生產的需求；重組DNA技術合成法剛剛起步，存在技術不成熟，產物生物活性肽的結構和生物活性不穩定等問題。由此看來，將花生粕中蛋白制備成花生葡萄糖苷酶抑制活性肽的最好方法是蛋白酶酶解法。

發明內容

本發明的目的在于為解決上述技術中存在的技術難題，提供一種利用熱榨花生粕制備葡萄糖苷酶抑制活性肽的方法。該方法集微波萃取浸提技術與復合植物水解酶和復合蛋白酶分步酶解技術于一體，在復合植物水解酶水解花生粕的細胞壁組分和微波將多糖、蛋白質等細胞內容物充分浸提到溶劑中的基礎上，復合蛋白酶的酶切位點很好的與蛋白質大分子結合，肽鍵被切斷，肽鏈縮短生成大量的小分子蛋白肽。由于在微波中進行酶解反應，使得反應時間大為縮短，酶解效率和蛋白肽得率大大提高；再進行二級超濾處理，蛋白肽的純度也大為提高，真正實現了溫和條件下快速制備花生葡萄糖苷酶抑制活性肽的目的。

為達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：一種利用熱榨花生粕制備葡萄糖苷酶抑制活性肽的方法，其步驟包括：

一、花生粕粉碎過150目篩，篩下物加入石油醚脫脂，干燥得到脫脂的花生粕粉，加入蒸餾水，微波加熱混合均勻，調節pH值，加入復合植物水解酶Viscozyme?L（其中包括阿拉伯聚糖酶、纖維素酶、β-葡聚糖酶、半纖維素酶和木聚糖酶在內的復合多糖酶），微波輔助酶解，得到Viscozyme?L酶解液；

二、調節Viscozyme?L酶解液pH值，加入復合蛋白酶，微波輔助酶解，滅酶，離心；

三、上清液1加入4倍于其體積的無水乙醇，冰箱中靜置過夜，離心，上清液2真空旋轉蒸發濃縮，超濾膜分離濃縮，透過液冷凍干燥得到葡萄糖苷酶抑制活性肽。

優選地，步驟一所述的花生粕粉碎篩下物與石油醚的質量與體積比為1:8.3-10.2（g/ml），石油醚沸程為30-60℃，脫脂的條件為51℃恒溫水浴振蕩器中，以325r/min轉速往復式振蕩脫脂16h，通風櫥中揮發干燥，脫脂的花生粕粉與蒸餾水的質量與體積比為1:9.7-10.7（g/ml），微波功率800w、加熱溫度47.5℃、加熱時間3.2min條件下混合均勻，pH值調節至4.8-5.8，Viscozyme?L加入量為每克花生粕粉17.5-20.5FBG（FBG為Viscozyme?L的酶活單位），微波功率800w、加熱溫度45.5-52.5℃、加熱時間8.5-10.5min條件下酶解。