[發(fā)明專利]一種具有雙重響應(yīng)性聚合物載藥納米膠束的制備

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• 申請日: 2014-10-15
• 公開（公告）號: CN104311821A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 倪才華;楊期頤;張麗萍;劉明;奚林;陶蕾;譚駿
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C08G69/48
• 分類號: C08G69/48;C08G69/40;C08F283/06;C08F220/54;A61K47/48;A61K31/704;A61K9/107;A61P35/00
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1.一種具有雙重響應(yīng)性聚合物載藥納米膠束，其特征是聚(N-異丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)-聚(L-谷氨酸-γ-酰肼)嵌段共聚物通過腙鍵共價負載阿霉素，然后在水溶液中自組裝形成納米膠束，膠束粒徑在250～550nm范圍，其中聚(L-谷氨酸-γ-酰肼)與阿霉素復(fù)合部分位于膠束的內(nèi)層，聚(N-異丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)鏈段位于膠束的外殼，膠束具有溫度和pH雙重響應(yīng)性，低臨界溶液溫度在人體體溫37℃，pH值在4.5～5.8時酰肼基團結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，腙鍵斷裂。

2.一種具有雙重響應(yīng)性聚合物載藥納米膠束的制備方法，其特征是制備反應(yīng)經(jīng)過了四步：

(1)首先在100ml的燒瓶中加入5.0gN-異丙基丙烯酰胺(NIPAm)和0.75g烯丙基聚乙二醇,40ml無水乙醇為溶劑，在0.115g鏈轉(zhuǎn)移劑巰基乙胺的存在下，以0.165g的偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，60℃在N₂保護下反應(yīng)12h后，減壓蒸餾除去大部分溶劑,并將其緩慢滴入到過量無水乙醚中得到白色沉淀，過濾后在35℃下真空干燥得粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物溶于少量二次蒸餾水中，升溫后出現(xiàn)沉析，趁熱過濾，35℃下真空干燥得白色產(chǎn)物為端氨基聚(N-異丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)共聚物，簡稱：PNE-NH₂；

(2)稱取L-谷氨酸20.0g和苯甲醇16.5g于250ml單口燒瓶中磁力攪拌混合均勻，慢慢升溫至70℃同時逐滴加入60％(w/w)硫酸22.1g，待溶液變澄清，減壓蒸餾5h，反應(yīng)液倒入與硫酸等摩爾的NaHCO₃溶液中至中和溶液呈中性，同時不斷攪拌，有大量白色沉淀生成，放入冰箱中過夜，減壓抽濾，用無水乙醇和去離子水清洗數(shù)遍，除去產(chǎn)物中剩余的苯甲醇和硫酸鈉，然后在5％的乙醇溶液中于70℃下重結(jié)晶，減壓過濾得銀白色片狀固體L-谷氨酸-芐酯(BLG)，35℃下真空干燥48h，產(chǎn)率為35％；然后稱取新制備的L-谷氨酸-芐酯3.05g和30ml無水四氫呋喃(10％，W/V)于100ml三口燒瓶中，水浴下逐漸升溫至45℃，使芐酯溶解，稱取4.2g三聚光氣(較BLG過量5％)倒入反應(yīng)溶液中，反應(yīng)5h得淡黃色澄清透明溶液，通N₂半小時，驅(qū)趕剩余光氣和產(chǎn)生的HCl氣體，用堿液吸收尾氣。反應(yīng)液緩慢滴加到大量無水石油醚中，放入冰浴中1h，有白色針狀晶體析出，減壓抽濾，四氫呋喃/無水石油醚體系純化兩次，35℃真空干燥12h得到活性單體產(chǎn)物，簡稱為：BLG-NCA，產(chǎn)率為89％；

以共聚物PNE-NH₂為大分子引發(fā)劑，引發(fā)活性單體BLG-NCA開環(huán)聚合反應(yīng)，在CH₂Cl₂溶劑中，室溫25℃和N₂保護磁力攪拌72h后，將反應(yīng)產(chǎn)物逐滴入過量無水乙醚中得白色沉淀，減壓過濾得粗產(chǎn)物，用蒸餾水水多次洗滌粗產(chǎn)物，離心分離得到聚(N-異丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)-聚(L-谷氨酸-γ-芐酯)嵌段共聚物，在該反應(yīng)中，PNE-NH₂與BLG-NCA的質(zhì)量比分別為1：2.0、1：2.5、1：3.0、1：3.5，所得產(chǎn)物分別簡稱：PNN-1、PNN-2、PNN-3、PNN-4；

(3)在250ml三口燒瓶中加入1.50g由上述(2)中得到的嵌段共聚物PNN-2，然后添加8.0g水合肼(80％)和60ml無水乙醇，在40℃溫度下回流反應(yīng)5小時后得白色渾濁液體，過濾后用無水乙醇洗滌產(chǎn)物數(shù)次，35℃真空干燥48h得聚(N-異丙基丙烯酰胺-co-聚乙二醇)-聚(L-谷氨酸-γ-酰肼)的嵌段共聚物，簡稱：PNN-co-NHNH₂；分別用PNN-1、PNN-3、PNN-4代替PNN-2做共聚物進行類似反應(yīng)；

(4)精確稱取50mg上述酰肼化產(chǎn)物PNN-co-NHNH₂溶于2ml四氫呋喃(THF)中，加入與酰肼基團等摩爾數(shù)的鹽酸阿霉素，緩慢滴加蒸餾水直到溶液有淡紅色且有明顯丁達爾效應(yīng)為止，避光磁力攪拌12h使載藥膠束穩(wěn)定，將載藥膠束溶液轉(zhuǎn)移到截留分子量為3500的透析袋內(nèi)避光透析24h，以除掉未載藥的小分子及藥物等，透析液轉(zhuǎn)入50ml的容量瓶中定容避光保存。