[發明專利]一種檢測水稻細菌性條斑病菌的雙抗體夾心酶聯免疫法

有效

• 申請號: 201410546445.X
• 申請日: 2014-10-16
• 公開（公告）號: CN104316688A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 匡華;孔德昭;胥傳來;徐麗廣;馬偉;劉麗強;宋珊珊;吳曉玲
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種檢測水稻細菌性條斑病菌的雙抗體夾心酶聯免疫法，其特征在于步驟為：

（1）水稻細菌性條斑病菌單克隆抗體的制備：

以水稻細菌性條斑病菌NCPPB?1150菌體做為免疫原，免疫8周齡的BALB/c小鼠；經雜交瘤技術融合、篩選得到；?

（2）單克隆抗體的配對篩選：

將純化后的7株單克隆抗體分別標記辣根過氧化物酶HRP，直接法鑒定標記成功后進行夾心法配對；配對參數如下：包被抗體2μg/mL；包被液為0.01M、pH9.6的碳酸鹽緩沖液；標品濃度1×10⁸cfu/mL；標品稀釋液0.01M、pH7.2的PBS；酶標抗體稀釋500倍使用；在此條件下，實驗成功得到了6對P/N值>5的配對；

（3）夾心法的建立：選擇檢測限穩定、靈敏的配對，即以3D7單克隆細胞株J號為包被抗體，4H6單克隆細胞株K號作為酶標抗體建立夾心法；具體參數如下：

包被抗體濃度：2μg/mL；

包被液：0.01M、pH9.6碳酸鹽緩沖液；

標品稀釋液：0.01M、pH7.2?PBS+0.2%?Tween；

酶標抗體濃度：2.5μg/mL；

反應時間：包被抗體：封閉37℃，反應2h；標準品：37℃，反應1h；酶標抗體37℃，反應1h；顯色時間10min。

2.根據權利要求1檢測水稻細菌性條斑病菌的雙抗體夾心酶聯免疫法，其特征在于：所述檢測水稻細菌性條斑病菌的雙抗體夾心酶聯免疫法的LOD為5.1×10⁴?cfu/mL。