[發(fā)明專利]同步定量聯(lián)檢乙肝三項的量子點免疫層析試條及其方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410544442.2
• 申請日: 2014-10-15
• 公開（公告）號: CN104297483A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設計）人: 王春英;馬義才;侯飛
• 申請（專利權）人: 成都領御生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明屬于體外診斷領域，具體涉及一種同步定量聯(lián)檢乙肝三項（HBsAg、HBeAg、HBcAb）的量子點免疫層析試條及其方法。

背景技術

乙肝是嚴重危害人類健康的重大傳染病，我國是乙肝感染大國，有6億多人感染過乙肝，約1.3億人攜帶乙肝病毒，乙肝防治具有非常重要意義。目前，乙肝標志物尚不能做到多項指標同步快速定量檢測。傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）每次只能檢測一種指標，執(zhí)行多次平行檢測流程才能最后得到各指標檢測結果，分析時間長（每做一次ELISA檢測至少需要40-60分鐘），試劑消耗多，價格昂貴，操作復雜，勞動量大。

量子點（quantum?dot,?QD）熒光發(fā)光效率高，激發(fā)譜線范圍寬，能“一元激發(fā)，多元發(fā)射”，發(fā)射譜線范圍窄且對稱，光漂白速度慢，熒光壽命長，粒徑與生物分子相近，表面修飾后能多功能化，不同粒徑和種類的量子點混合物產生的特征波長熒光光譜不交疊，非常適用于樣品多組分分析。本發(fā)明公開一種同步定量聯(lián)檢乙肝三項的量子點免疫層析試條及其方法，以解決乙肝標志物多指標同步快速定量檢測問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的第一個目的是公開一種同步定量聯(lián)檢乙肝三項的量子點免疫層析試條。本發(fā)明的第二個目的是公開所述試條的制備方法、標準曲線制作方法、以及用所述試條同步定量檢測HBsAg（乙肝表面抗原）、HBeAg（乙肝e抗原）、HBcAb（乙肝核心抗體）的方法。

本發(fā)明上述目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的：

所述的同步定量聯(lián)檢乙肝三項的量子點免疫層析試條，包括順次搭接固定在底襯8上的樣品墊1、紅細胞濾膜2、標記墊3、分析膜7、吸水墊6。

所述標記墊3為玻璃纖維膜。所述分析膜7為硝酸纖維素膜、尼龍膜、或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，其上具有檢測帶（即T帶）4和質控帶（即C帶）5。所述底襯8為聚脂或塑料板。

所述標記墊3包被有不同波長量子點對應標記的鼠抗HBsAg單抗、鼠抗HBeAg單抗和HBcAg的混合物。所述分析膜7的T帶4包被有兔抗HBsAg抗體、兔抗HBeAg抗體、HBcAg的混合物。所述分析膜7的C帶5包被有二抗質控物羊抗鼠抗體。

本發(fā)明所述試條的標記墊3的量子點包括ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag₂S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)₂、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點為核、二氧化硅為殼的核-殼型納米復合粒子。

本發(fā)明所述同步定量聯(lián)檢乙肝三項的量子點免疫層析試條的制備方法包括下述步驟：?

A.?量子點偶聯(lián)抗體/抗原：

a)?取不同波長量子點分別用磷酸緩沖液（PBS）調pH=6-9，加入EDC（l-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺鹽酸鹽）和NHS（N-羥基硫代琥珀酸亞胺）室溫活化10-60min。

b)?分別對應加入鼠抗HBsAg單抗、鼠抗HBeAg單抗和HBcAg旋渦振蕩反應0.5-3h。

c)?分別對應加入BSA封閉反應0.5-2h。

d)?離心純化產物。

e)?取沉淀用PBS緩沖液重懸分散，4℃保存。

B.?試條組件制備：

a)?樣品墊1:??選用纖維素膜切成一定規(guī)格的膜塊，將該膜塊放入含有0.1%-10%?BSA和0.01%-10%?Tween?20的PBS中浸泡，取出，干燥備用。

b)?紅細胞濾膜2：選紅細胞濾膜切成一定規(guī)格膜塊，干燥備用。