[發明專利]一種龍脷葉懸浮細胞培養的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410540508.0
• 申請日: 2014-10-14
• 公開（公告）號: CN104285797A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京帝道農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及龍脷葉懸浮細胞培養的快繁方法，屬于生物技術領域。

背景技術

龍脷葉，Sauropus?spatulifolius?Beille，大戟科，別名：龍舌葉、龍味葉、牛耳葉分布于福建、廣東、廣西。原產于越南北部，馬來半島有栽培。常綠小灌木，高10-40厘米；莖粗糙；枝條圓柱狀，直徑2-5毫米，蜿蜒狀彎曲，多皺紋；幼時被腺狀短柔毛，老漸無毛，節間短，長2-20毫米。具有清肺，治肺熱咳嗽，止痰火咳嗽哮喘，治內傷肺癆失音，喉痛的功效，目前主要采用野外采集，懸浮細胞的培養不受地域的影響，既方便又快捷。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是一種龍脷葉懸浮細胞培養的快速繁殖方法，本發明方法所制備的龍脷葉懸浮細胞增殖率高，生長周期短，品質好，以期為工廠化生產提供技術支撐。

為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案：

取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.1mg/L+2，4-D1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23℃，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C⁺誘變，劑量為1×10¹³ions/cm²，能量為30-50keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25℃，光照2500lx，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行懸浮細胞培養，接種量60g/L，溫度27℃，水平振蕩培養，轉速70r/min，培養周期30天。

采用本發明制備的龍脷葉細胞增殖率高，周期短，產量大，污染小，利于大規模種植。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.1mg/L+2，4-D1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23℃，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C⁺誘變，劑量為1×10¹³ions/cm²，能量為30keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25℃，光照2500lx，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行懸浮細胞培養，接種量60g/L，溫度27℃，水平振蕩培養，轉速70r/min，培養周期30天，誘變增殖率78%。

實施例2

取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.1mg/L+2，4-D1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23℃，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C⁺誘變，劑量為1×10¹³ions/cm²，能量為50keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25℃，光照2500lx，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行懸浮細胞培養，接種量60g/L，溫度27℃，水平振蕩培養，轉速70r/min，培養周期30天，誘變增值率74%。

實施例3

取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.1mg/L+2，4-D1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23℃，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C⁺誘變，劑量為1×10¹³ions/cm²，能量為40keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25℃，光照2500lx，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行懸浮細胞培養，接種量60g/L，溫度27℃，水平振蕩培養，轉速70r/min，培養周期30天，誘變增殖率77%。