[發明專利]一種龍脷葉懸浮細胞培養的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410540508.0
• 申請日: 2014-10-14
• 公開（公告）號: CN104285797A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 劉東鋒;楊成東
• 申請（專利權）人: 南京帝道農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.?一種龍脷葉懸浮細胞培養的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的誘變、懸浮細胞的培養，其主要步驟如下：

（1）取龍脷葉幼嫩的葉片，在超凈工作臺上進行消毒處理；

（2）取步驟（1）消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.1mg/L+2，4-D1mg/L培養基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23℃，濕度75%；

（3）取步驟（2）誘導出來的愈傷組織，對其進行C⁺誘變，劑量為1×10¹³ions/cm²，能量為30-50keV；

（4）取步驟（3）誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25℃，光照2500lx，濕度85%；

（5）取步驟（4）增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養基中進行懸浮細胞培養。

2.?按照權利要求1所述的一種龍脷葉懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（1）中所述龍脷葉無菌葉片的獲得為，取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍。

3.?按照權利要求1所述的一種龍脷葉懸浮細胞培養的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（5）中懸浮細胞的培養方法為接種量60g/L，溫度27℃，水平振蕩培養，轉速70r/min，培養周期30天。