[發(fā)明專利]聲諾維聯(lián)合聲動力學(xué)療法協(xié)同殺傷CT26細(xì)胞的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410538596.0
• 申請日: 2014-10-13
• 公開（公告）號: CN104328160A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉全宏;王海萍;王筱冰;王攀
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西師范大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責(zé)任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種聲敏劑華卟啉鈉介導(dǎo)的聲動力學(xué)療法結(jié)合超聲微泡造影劑聲諾維殺傷小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞的方法。

技術(shù)背景

惡性腫瘤是威脅人類健康的主要疾病之一，目前治療惡性腫瘤的方法有很多，但主要方法依然為傳統(tǒng)的放療、化療及手術(shù)治療。傳統(tǒng)方法治療惡性腫瘤的效果毋庸置疑，但在其保證治療效果的同時，也存在很大的缺陷。化療及放療嚴(yán)重的毒副作用及外科手術(shù)對患者形體上的創(chuàng)傷都顯示出了傳統(tǒng)療法的缺陷，因此尋找一種安全靶向的新型腫瘤治療手段一直是當(dāng)代醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。目前光動力學(xué)療法、放化療與其他療法及藥物的聯(lián)合作用及中藥療法已經(jīng)作為腫瘤治療的新手段開始了大量研究。光動力學(xué)療法因其靶向性高、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)在Dougherty課題組首次報道之后，受到眾多學(xué)者的關(guān)注，并已批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床治療，目前已在皮膚等淺表腫瘤的治療中取得了良好的治療效果。但光動力學(xué)療法由于激光的穿透力較弱，無法對深層腫瘤達(dá)到一定的治療效果。

為解決光動力學(xué)療法的缺陷，研究者利用超聲代替激光來激活腫瘤組織中的光敏劑達(dá)到靶向殺傷腫瘤細(xì)胞的效果，并將這種新型腫瘤治療手段命名為聲動力學(xué)療法。超聲作為一種機(jī)械波對生物組織有較強(qiáng)的穿透力，并且聚焦超聲能無創(chuàng)傷的聚焦于深層組織。目前大部分光敏劑被發(fā)現(xiàn)同時可以被超聲激活，產(chǎn)生活性氧等化學(xué)物質(zhì)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、壞死，有效抑制腫瘤組織的生長。聲動力學(xué)療法作為一種新型的腫瘤治療手段，具有安全、靶向、微創(chuàng)、應(yīng)用范圍廣等諸多優(yōu)點(diǎn)，聲動力學(xué)療法自問世以來，研究者對其進(jìn)行了大量的研究并取得了一定的成就，也顯示出了聲動力學(xué)療法較好的應(yīng)用前景。

隨著聲動力學(xué)療法研究的深入開展，已有學(xué)者開始使用納米級聲敏劑或?qū)⒙晞恿W(xué)療法與其他療法相結(jié)合從而拓寬聲動力學(xué)療法的使用范圍及增加聲動力學(xué)療法的抗癌效果。2013年阮等初步探索了聲敏劑聯(lián)合聲諾維對人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的殺傷效果，實(shí)驗(yàn)采用20μg/mL血卟啉結(jié)合1.5W/cm²超聲輻照處理MDA-MB-231細(xì)胞，超聲聯(lián)合血卟啉及聲諾維處理組細(xì)胞存活率明顯降低至31.47％，說明聲動力學(xué)療法聯(lián)合超聲微泡造影劑作為一種新的殺傷腫瘤細(xì)胞的嘗試能夠顯著降低超聲及聲敏劑的有效協(xié)同作用閾值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種聲敏劑華卟啉鈉介導(dǎo)聲動力學(xué)療法與超聲微泡聲諾維聯(lián)合使用殺傷小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞的方法。

解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：將小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在含10％胎牛血清、1％青霉素、1％鏈霉素、1％谷氨酰胺的RPIM1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁生長狀態(tài)良好后，在含0.5～4μg/mL華卟啉鈉、1％青霉素、1％鏈霉素、1％谷氨酰胺的RPIM1640培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)3～5小時，加入聲諾維，聲諾維數(shù)量與小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞數(shù)量比值為5～10:1，在頻率為1.0MHz、輸出聲強(qiáng)為0.36～0.54W/cm²條件下超聲處理30～60s。

本發(fā)明優(yōu)選將細(xì)胞貼壁生長狀態(tài)良好的小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在含1～2μg/mL華卟啉鈉、1％青霉素、1％鏈霉素、1％谷氨酰胺的RPIM1640培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)4小時，加入聲諾維，聲諾維數(shù)量與小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞數(shù)量比值優(yōu)選5:1，在頻率為1.0MHz、輸出聲強(qiáng)為0.36～0.54W/cm²條件下超聲處理30～60s。

上述的小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞在RPIM1640培養(yǎng)基中的接種密度優(yōu)選為2×10⁵～4×10⁵個/mL。

上述的聲敏劑華卟啉鈉是從光敏劑Photofrin?II中分離純化出來的，是一種以醚鍵連接的卟啉二聚體鈉鹽，結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明采用聲敏劑華卟啉鈉結(jié)合超聲微泡造影劑聲諾維，在超聲刺激下殺傷小鼠結(jié)直腸癌CT26細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，超聲與華卟啉鈉結(jié)合聲諾維后表現(xiàn)出很好的協(xié)同作用，對CT26細(xì)胞具有很高的殺傷效果。

附圖說明

圖1是華卟啉鈉對細(xì)胞存活率的影響。

圖2是超聲對細(xì)胞存活率的影響。

圖3是不同處理方法作用4小時后對細(xì)胞存活率的影響。

圖4是不同處理方法作用24小時后對細(xì)胞存活率的影響。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅限于這些實(shí)施例。

實(shí)施例1