[發明專利]膠原纖維固定化大腸桿菌作為生物傳感器識別元件快速測定BOD的方法

無效

• 申請號: 201410537863.2
• 申請日: 2014-10-14
• 公開（公告）號: CN104267082A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種以膠原纖維固定化大腸桿菌作為生物識別元件快速測定BOD的方法，其特征在于，該方法包括選擇膠原纖維固定化大腸桿菌作為生物識別元件、制備膠原纖維固定化大腸桿菌生物識別元件的工藝和利用膠原纖維固定化大腸桿菌作為生物識別元件對BOD的快速測定，以及該固定化大腸桿菌的保存方法和該微生物識別元件的活化方法。

2.權力要求1所述以膠原纖維固定化大腸桿菌作為生物識別元件快速測定BOD的方法，其特征在于，所述的微生物固定化載體為金屬離子鋯(Zr)改性后的膠原纖維（ZICF）。

3.權利要求1所述以膠原纖維固定化大腸桿菌作為生物識別元件快速測定BOD的方法，其特征在于，所述的固定化微生物種類為大腸桿菌(大腸埃希氏菌；Escherichia?coli?)。

4.權利要求1所述膠原纖維固定化大腸桿菌的制備：稱取干重0.5g?ZICF置于無菌水中浸泡5-12h；大腸桿菌在營養肉湯培養基中活化培養18-24h，經離心、無菌生理鹽水清洗后收集細胞于無菌生理鹽水中制得菌懸液，并調節菌懸液濃度為10⁷-10¹⁰cfu/mL；將ZICF過濾后加入上述菌懸液中，37℃震蕩吸附5h后用無菌生理鹽水清洗至無游離菌檢出，即得膠原纖維固定化大腸桿菌。

5.權利要求1所述膠原纖維固定化大腸桿菌生物識別元件的制備：每次稱量濕重為0.10-0.30g的膠原纖維固定化大腸桿菌，將固定化大腸桿菌置于兩層200目尼龍網之間，使之形成一層固定化微生物膜，使用時將該膜緊貼于溶解氧電極頭前的半透膜上。

6.權利要求1所述利用膠原纖維固定化大腸桿菌作為生物敏感膜對BOD的快速測定：測量時，將附有固定化大腸桿菌的溶解氧電極頭置于盛有0.07mol/L?磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀緩沖液(PBS緩沖液)的測量杯中，通過微量曝氣管以24L/h的曝氣強度對緩沖液進行曝氣，測量溫度為37℃、pH為7，待溶解氧（DO）值穩定后加入含有機物的樣品溶液，固定化微生物分解有機物導致水中DO值下降到另一個穩定值，求得前后兩次DO值之差，通過標準曲線計算所測水樣的BOD值。

7.權利要求1所述的膠原纖維固定化大腸桿菌的保存方法，其特征在于，膠原纖維固定化大腸桿菌的保存條件為：0.07mol/L?PBS緩沖液，pH=6-7，溫度4℃。

8.權利要求1所述的膠原纖維固定化大腸桿菌的活化方法，其特征在于，膠原纖維固定化大腸桿菌的活化方法為：將存于4?℃條件下的固定化大腸桿菌在36-37?℃條件下于原溶液中放置24h；組成BOD傳感器后對濃度為50-200?mg/L的葡萄糖谷氨酸（GGA）溶液多次測定次，DO下降值連續5次相對偏差小于5%，即完成固定化大腸桿菌的活化。