[發明專利]含抗稻瘟病基因重組DNA片段植株的選育方法

有效

• 申請號: 201410532684.X
• 申請日: 2014-10-10
• 公開（公告）號: CN105567791B
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 周發松;劉剛;韋懿;宋丁丁;喻輝輝;姚玥;李旭;潘麗;李菁;陳光;陸青;張學堂;邱樹青;何予卿;李榮田;張啟發
• 申請（專利權）人: 中國種子集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;A01H1/02
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.抗稻瘟病基因重組DNA片段，其特征在于，所述重組DNA片段從5′端至3′端由SEQ IDNo.1所示的核苷酸序列，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之間的核苷酸序列，以及SEQ ID No.2所示的核苷酸序列組成；所述SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之間的核苷酸序列包括水稻‘K22’中具有稻瘟病抗性的部分基因區段；

其中，SEQ ID No.1所示的核苷酸序列位于水稻第6染色體的10200127bp到10202363bp區間，SEQ ID No.2所示的核苷酸序列位于水稻第6染色體的10473291bp到10475759bp區間。

2.用于檢測權利要求1所述抗稻瘟病基因重組DNA片段的方法，其特征在于，根據SEQID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，分別設計特異性PCR擴增引物，以待測水稻基因組為模板，進行PCR反應，并分析PCR擴增產物；

用于擴增及檢測SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的引物組合為：

組合I

擴增引物：

A08X11F:5’-TAAGTAGCATGATCACGACGGTTGA-3’

A08X11R:5’-CACATCAGTAGTGTTGACGCTTG-3’

測序引物：

A08X11F:5’-TAAGTAGCATGATCACGACGGTTGA-3’

組合II

擴增引物：A08X48F:5’-CATCCTCGACCGTTTGCGA-3’

A08X48R:5’-TGCTTCAGGGTGATGGGGA-3’

測序引物：A08X48F:5’-CATCCTCGACCGTTTGCGA-3’

組合III

擴增引物：A08X47F:5’-CAGATAACTAAACAGACA-3’

A08X47R:5’-CGATCCGGTGCTTCGTGA-3’

測序引物：A08X47R:5’-CGATCCGGTGCTTCGTGA-3’

組合IV

擴增引物：A08X20F:5’-GAGCAGCACCATGATCACCA-3’

A08X20R:5’-TGTTAGTTAGCCCTCCTGTTGAT-3’

測序引物：A08X20F:5’-GAGCAGCACCATGATCACCA-3’

用于擴增及檢測SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的引物組合為：

組合V

擴增引物：A08X12F:5’-TGTATGCCACCACCTCTTCCT-3’

A08X12R:5’-TATTCACCGTAAGATCAAAACCA-3’

測序引物：A08X12F:5’-TGTATGCCACCACCTCTTCCT-3’

組合VI

擴增引物：A08X28F:5’-GGAGTACCTAAGTACATGCA-3’

A08X28R:5’-TGGCTCCATAGCAGTCACCAGTA-3’

測序引物：A08X28F:5’-GGAGTACCTAAGTACATGCA-3’

組合VII

擴增引物：A08X29F:5’-GTACTGCTATTCACGTGAGA-3’

A08X29R:5’-TGTACCCATTATTTTGGACCATT-3’

測序引物：A08X29F:5’-GTACTGCTATTCACGTGAGA-3’

組合VIII

擴增引物：A08X30F:5’-GGAAGGTTAGGTGGGATGCA-3’

A08X30R:5’-GCTCCTACAAAAGCTCCTAGATC-3’

測序引物：A08X30F:5’-GGAAGGTTAGGTGGGATGCA-3’

組合IX

擴增引物：A08X31F:5’-TGTAGGAACACTAATGGACT-3’

A08X31R:5’-TTCGTAGTATGACTCTAAGTC-3’

測序引物：A08X31F:5’-TGTAGGAACACTAATGGACT-3’。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，采用Sanger測序法分析PCR擴增產物。

4.權利要求2中用于擴增SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列的引物組合I～IX在檢測含抗稻瘟病基因重組DNA片段植株中的應用，其中所述引物的定義同權利要求2中所述。