[發明專利]一種二乙酰精胺的檢測試劑盒及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410531126.1
• 申請日: 2014-10-10
• 公開（公告）號: CN104316685A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 李文欣;劉峰
• 申請（專利權）人: 遼寧邁迪生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N33/574
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種二乙酰精胺的檢測試劑盒，包括試紙條，試紙條從加樣端依次為玻璃纖維素膜、金墊、NC膜、吸水紙；其特征在于：金墊上包被有膠體金標記的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的單克隆抗體及羊抗兔抗體；NC膜上的檢測區(T)有DiAcSpm和CRE的抗原、標準區(C)有羊抗兔或羊抗鼠抗體。

2.按權利要求1所述的二乙酰精胺的檢測試劑盒，其特征在于：

所述DiAcSpm抗原為乙酰基精胺(AcSpm)同牛血清白蛋白(BSA)偶聯所得；

所述DiAcSpm抗體由乙酰基精胺(AcSpm)同牛血清白蛋白(BSA)偶聯再免疫小鼠，而獲得DiAcSpm單克隆抗體；

所述CRE抗原為CRE同牛血清白蛋白(BSA)或牛甲狀腺球蛋白(BTG)偶聯所得；

所述CRE抗體為CRE同牛血清白蛋白(BSA)或牛甲狀腺球蛋白(BTG)偶聯再免疫鼠或羊，而獲得CRE單克隆抗體。

3.按權利要求1或2所述的二乙酰精胺的檢測試劑盒，其特征在于：所述金墊上包被有膠體金標記的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的單克隆抗體及羊抗兔抗體的制備采用鋪金或噴金的方式獲得。

4.按權利要求3所述的二乙酰精胺的檢測試劑盒，其特征在于：所述鋪金或噴金的方式，分別向經調整PH值的膠體金中加入DiAcSpm和CRE的單克隆抗體，以及兔抗體，靜置5-15min后分別加入20％BSA進行封閉，再次靜置5-15min,靜置后分別離心收集沉淀，所得沉淀再分別用復溶液復溶，所得復溶后的溶液混勻后均勻鋪在或噴在玻璃纖維素膜或聚酯纖維素膜上，真空凍干、真空抽干或烘干后即得到包被有膠體金標記的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的單克隆抗體及羊抗兔抗體的金墊。

5.按權利要求4所述的二乙酰精胺的檢測試劑盒，其特征在于：所述鋪金或噴金的方式，分別向經調整PH值的膠體金中加入1-25μg?DiAcSpm單克隆抗體、1-25μg?CRE的單克隆抗體，以及10-30μg兔抗體，靜置5-15min后加入20％BSA進行封閉，再次靜置5-15min,靜置后以9000-12000的轉數離心7-15min收集沉淀，分別對獲得的DiAcSpm單克隆抗體、CRE的單克隆抗體和兔抗體沉淀中依次加入復溶液對沉淀進行復溶，再將所得復溶的溶液混合，混勻后均勻鋪在或噴在玻璃纖維素膜或聚酯纖維素膜上，真空凍干、真空抽干或烘干后，即得到包被有膠體金標記的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的單克隆抗體及羊抗兔抗體的金墊；

其中，經調整PH值為的膠體金是每1ml膠體金，用2-10μL?0.2M?K₂CO₃調整膠體金的PH值；

所述，鋪金方式所得獲得的DiAcSpm單克隆抗體、CRE的單克隆抗體和兔抗體沉淀中依次加入500-1000μL或30-50μL、500-1000μL復溶液對沉淀進行復溶；

噴金方式所得獲得的DiAcSpm單克隆抗體、CRE的單克隆抗體和兔抗體沉淀中依次加入30-50μL、1-2ml或30-50μL復溶液對沉淀進行復溶。

6.按權利要求4或5所述的二乙酰精胺的檢測試劑盒，其特征在于：所述復溶液按重量百分比計，0.3％-1％Tris、0-1％檸檬酸三鈉、0-2％PVP40、0.1-0.5％TWEEN?20、0-0.5％Triton?X-405、0-0.5％NP40、0-4％蔗糖、0.5-1.5％PEG?20000、0.1-1％BSA、0-1％Casein-Na、0-1％SDS，余量為水。

7.一種二乙酰精胺的檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：

1)采用膠體金分別標記DiAcSpm和CRE的單克隆抗體及兔抗體，分別獲得復溶的溶液；

2)將上述獲得的復溶的溶液混合，混勻后均勻鋪在或噴在玻璃纖維素膜或聚酯纖維素膜上，真空凍干、真空抽干或烘干后待用，即得金墊；

3)將DiAcSpm和CRE的抗原溶液、羊抗兔溶液，分別固定在NC膜檢測區的檢測線上和標準區的標準線上，即得到包被好的NC膜；

4)將玻璃纖維素膜、上述獲得的鋪金或噴金的金墊、包被抗原的NC膜、吸水紙依次粘附在PVC板上，斬切、組裝后即得檢測試劑盒。