[發明專利]一種埃博拉病毒快速分型鑒別檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201410530911.5
• 申請日: 2014-10-10
• 公開（公告）號: CN104328216A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 周其偉;楊海星;李麗梅;周阿濤;高秀潔
• 申請（專利權）人: 中山大學達安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種埃博拉病毒分型鑒別檢測試劑盒，包括：1)RT-PCR反應液、引物探針混合液、RT-PCR反應酶系、DEPC?H₂O，陰性質控品、陽性質控品和2)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，其中引物探針混合液由埃博拉病毒四種型特異性的正、反向引物，埃博拉病毒四種型特異性的探針組成，其特征在于：?

1)本迪布焦埃博拉病毒特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-TTGGAAAGTAATGCGGTAAAATA-3’和5’-GCAGCCAATGTTCTCTTGATGT-3’，本迪布焦埃博拉病毒特異性探針的序列是5’-CTACTCCCTGCTGCCTCGAGTGGAAA-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；該對引物探針可特異性地檢測本迪布焦埃博拉病毒，對其他型別埃博拉病毒無交叉反應；?

2)扎伊爾埃博拉病毒特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-GATGCCAACGAYGCTGTGAT-3’和5’-TGCAAGAGGATGGAGACGAA-3’，扎伊爾埃博拉病毒特異性探針的序列是5’-TCAGTGGCTCAAGCTCGTTTTTCAGGT-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團HEX和熒光淬滅基團BHQ1；該對引物探針可特異性地檢測扎伊爾埃博拉病毒，對其他型別埃博拉病毒無交叉反應；?

3)蘇丹埃博拉病毒特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-TGGTGTTGTTGACCCGTATG-3’和5’-CGTCGTCCAAATTGAAGAGAT-3’，蘇丹埃博拉病毒特異性探針的序列是5’-CCTGACTACGAGGATTCGGCTGAAG-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團Texas?Red和熒光淬滅基團Eclipse；該對引物探針可特異性地檢測蘇丹埃博拉病毒，對其他型別埃博拉病毒無交叉反應；?

4)塔伊森林埃博拉病毒特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-CAACAACAAACACAGTCTTACAGG-3’和5’-TTATCCCTGGCGTATTCTTGA-3’，塔伊森林埃博拉病毒特異性探針的序列是5’-CTCCACACAAAACAATGACAATCCTGC-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團Cy5和熒光淬滅基團Eclipse；該對引物探針可特異性地檢測塔伊森林埃博拉病毒，對其他型別埃博拉病毒無交叉反應。?

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征還在于所用探針3‘端可采用TAMRA、BHQ1、BHQ2、Eclipse、Dabcy?1中任一熒光淬滅基團標記，所述2)中所用探針5‘端可采用VIC、HEX、YELLOW中任一熒光基團標記，所述3)中所用探針5‘端可采用ROX、Texas?Red中任一熒光基團標記，所述4)中所用探針5‘端可采用CY5、CY5.5中任一熒光基團標記。?

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征還在于引物探針混合液中引物濃度均為0.2mmol/L，探針濃度均為0.1mmol/L。?

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征還在于RT-PCR反應液由pH值為8.0～8.8的?50mmol/L?Tris-HCl、3～8mmol/L?MgCl₂、150～350mmol/L?KCl組成。?

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其中RT-PCR反應酶系由熱啟動Taq酶、逆轉錄酶、dNTPs組成，特征在于每人份RT-PCR反應酶系中熱啟動Taq酶的用量為5～10U；逆轉錄酶用量為1.5～5U；dNTPs為6～12mmol。?

6.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于PCR擴增的條件為：50℃15分鐘，95℃15分鐘；94℃15秒，58℃35秒，45個循環。?

7.根據權利要求1的試劑盒，還提供了陰性質控品和陽性質控品，其特征在于陰性質控品為健康人血漿，陽性質控品為含有埃博拉病毒四種型別的目的基因RNA。?

8.根據權利要求7的試劑盒，陽性質控品為基因合成方式制備的含四種型別埃博拉病毒目的全長的RNA。?