[發(fā)明專利]益生菌中黑芥子酶活性檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410530104.3
• 申請日: 2014-10-10
• 公開（公告）號: CN104342482A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發(fā)明（設計）人: 單毓娟;張?zhí)m威;李寶龍;任明華;宋微;雷鵬;何燦霞;田思聰
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 高媛

1.一種益生菌中黑芥子酶活性檢測方法，其特征在于所述方法步驟如下：

一、將待測益生菌于無菌條件下以2%接種量接種于改良MRS液體培養(yǎng)基中，于37℃恒溫培養(yǎng)24h，如此反復活化2-3次即可使菌株恢復活力；

二、初篩：用含黑芥子硫苷酸鉀濃度為5mmol/L、不含葡萄糖的改良MRS培養(yǎng)液5mL培養(yǎng)待篩菌株，培養(yǎng)時間48h，培養(yǎng)溫度30℃，觀察菌株生長情況，能夠正常生長的菌株用于下一步實驗；

三、復篩：配置葡萄糖和黑芥子硫苷酸鉀濃度均為10mmol/L的改良MRS培養(yǎng)液，將待篩選菌株按常規(guī)接種量接種到該改良MRS培養(yǎng)液30℃過夜培養(yǎng)12-18h，然后離心取菌體，加入10mLMES緩沖液沖洗菌體，再次離心后將菌體重懸于3mLMES緩沖液中，將菌懸液與10mmol/L黑芥子硫苷酸鉀的MES緩沖液按照1-1.5:1的體積比混合，在30℃培養(yǎng)24-48h，最后離心取上清液在340nm處測定吸光度，篩選出吸光度值差異在0.2以上的菌株。

2.根據(jù)權利要求1所述的益生菌中黑芥子酶活性檢測方法，其特征在于所述益生菌為桿菌類益生菌。

3.根據(jù)權利要求1所述的益生菌中黑芥子酶活性檢測方法，其特征在于所述改良MRS液體培養(yǎng)基的配制方法如下：蛋白胨10g、牛肉浸取物?10g、酵母提取物?5.0g、乙酸鈉5.0g、檸檬酸鈉2.0g、磷酸氫二鉀?2.0g、七水硫酸鎂?0.2g、七水硫酸錳?0.05g，溶于水，然后加1ml?吐溫?80，用水調(diào)至1000ml。

4.根據(jù)權利要求1或3所述的益生菌中黑芥子酶活性檢測方法，其特征在于所述含黑芥子硫苷酸鉀濃度為5mmol/L、不含葡萄糖的改良MRS培養(yǎng)液的配制方法如下：無菌100mmol/L黑芥子硫苷酸鉀與改良MRS液體培養(yǎng)基以1:20?的體積比混合。

5.根據(jù)權利要求1所述的益生菌中黑芥子酶活性檢測方法，其特征在于所述10mmol/L葡萄糖、10mmol/L黑芥子硫苷酸鉀改良MRS的配制方法如下：①10mmol/L葡萄糖改良MRS的配制：蛋白胨10g、牛肉浸取物?10g、酵母提取物?5.0g、乙酸鈉5.0g、檸檬酸鈉2.0g、磷酸氫二鉀?2.0g、七水硫酸鎂?0.2g、七水硫酸錳?0.05g，1.8g葡萄糖溶于水，然后加1ml?吐溫?80，用水調(diào)至1000ml，②10mmol/L葡萄糖改良MRS與無菌100mmol/L黑芥子硫苷酸鉀以20:1的體積比混合。