[發明專利]一種草果與草豆蔻的指紋圖譜鑒別方法

有效

• 申請號: 201410528048.X
• 申請日: 2014-10-10
• 公開（公告）號: CN104297373A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 覃潔萍;何俏明;李耀華;梁臣艷
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及中藥鑒別領域，具體涉及一種草果與草豆蔻藥材的指紋圖譜鑒別方法。

背景技術

草果別名草果子，草果仁，始載于《本草綱目》，2010年版《中國藥典》記載草果為姜科植物草果Amomum?tsao-ko?Crevost?et?Lemaire的干燥成熟果實，具燥濕溫中，除痰截瘧的功效；而草豆蔻為姜科植物Alpinia?Katsumadai?Hayata的干燥近成熟的種子，具燥濕行氣，溫中止嘔的功效；草果與草豆蔻功效不同，臨床應用也有差異，但由于兩者同為姜科藥材，其外形、氣味非常相似，常常容易混淆使用。為區別鑒定草果與草豆蔻，余南才等人從性狀，來源，顯微，薄層色譜等方面對草果與草豆蔻進行了鑒別比較。

目前草果與草豆蔻藥材的鑒別主要是根據外觀氣味及顯微形態特征等傳統方法來進行，這些方法有的比較繁瑣，有的不夠客觀，有時仍不容易準確鑒別；因此，建立一種與國際接軌的、客觀先進、快速準確的草果與草豆蔻藥材的指紋圖譜鑒別方法，具有重要的意義。

近年來，色譜指紋圖譜已成為國際公認的用于鑒別與控制中藥材質量的最有效的手段，它是現代分析科學的優秀成果與中醫藥整體綜合觀的有機融合，是一種到目前為止在國際上較為認可的利用現代科學技術手段所能達到的用于表現中藥復雜體系特性的最好方法。GC-MS指紋圖譜是近年來發展起來的用于中藥揮發油成分分析與鑒別的一種方法，與普通色譜指紋圖譜相比，它不僅可給出類似普通色譜指紋圖譜的峰型特征，還可同時對各色譜峰的多個組份同時進行快速定性，給出各個特征指紋峰的成分以及結構。因此，在中藥定性與鑒別方面，GC-MS指紋圖譜比普通色譜指紋圖譜的選擇性更強，具有更多的優勢。最近曾有應用水蒸汽蒸餾或超臨界流體提取草果或草豆蔻揮發油，然后用GC-MS方法測定其揮發油指紋圖譜的報道，但由于這些方法通常所需的藥材量較多，提取過程比較麻煩，提取時間一般都比較長；而且水蒸汽蒸餾法因為溫度高、提取時間長，可能還會造成部分有效成分的破壞及損失，均不適用于作為藥材的快速鑒別方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種可用于準確快速鑒別草果與草豆蔻的指紋圖譜鑒別方法。該法采用乙酸乙酯、二氯甲烷或石油醚為萃取溶劑，采用超聲輔助萃取或冷浸提取制備供試品溶液，用GC-MS方法在一定條件下測得指紋圖譜并用于草果與草豆蔻的鑒別?？茖W試驗證明，該法簡便、快速；所需藥材量少，測得的指紋圖譜特征及差異明顯，重復性高，可用于草果和草豆蔻的準確快速鑒別與質量控制。

本發明的草果與草豆蔻藥材的指紋圖譜鑒別方法具體包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取草果和草豆蔻藥材粉末4-6克，精密稱定，分置于兩個錐形瓶中，分別加入乙酸乙酯、二氯甲烷或石油醚20-30ml，冷浸24小時或超聲輔助提取30-40分鐘，放冷，加相應溶劑補足失去的重量，過濾，取續濾液置離心管中，用無水硫酸鈉干燥去除水分，以13000r/min離心10分鐘，取上清液，即得草果和草豆蔻藥材的供試品溶液；

(2)色譜分析條件：彈性石英毛細管色譜柱，以高純He為載氣，流量1.0ml/min；進樣口溫度230℃-250℃；不分流進樣；采用程序升溫進行分析；

(3)質譜分析條件：電離方式為EI，電子能量70eV，檢測器溫度250℃-280℃，離子源溫度230℃，四級桿溫度150℃，倍增電壓1782v，發射電流34.6μA，掃描質量范圍：50-500amu；溶劑延遲3.0min；

(4)測定方法：分別取草果和草豆蔻的供試液各1μl，注入GC-MS聯用儀，測定草果和草豆蔻的總離子流圖，即得兩藥材的鑒別用指紋圖譜。

經過研究，本發明優化的草果與草豆蔻藥材的指紋圖譜鑒別方法按以下步驟實施：

(1)供試品溶液的制備：取草果和草豆蔻藥材粉末5克，精密稱定，分置于兩個錐形瓶中，分別加入乙酸乙酯20ml，超聲輔助提取30分鐘，放冷，加乙酸乙酯補足失去的重量，過濾，取續濾液置離心管中，用無水硫酸鈉干燥去除水分，以13000r/min離心10分鐘，取上清液，即得草果和草豆蔻藥材的供試品溶液；

(2)色譜分析條件：HP-5MS?UI彈性石英毛細管色譜柱，其規格為30m×0.25mm×0.25μm；載氣為高純He，純度≥99.99％，流量1.0ml/min；進樣口溫度250℃；不分流進樣；程序升溫程序為：初始溫度80℃，保持3min，以6℃/min升至180℃，保持3min；