[發(fā)明專利]一種甲磺酸達(dá)比加群酯含量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410526324.9
• 申請日: 2014-10-08
• 公開（公告）號: CN105572275B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜明;趙迎春;馮新光
• 申請（專利權(quán)）人: 華仁藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 青島聯(lián)信知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)37227
• 代理人: 高洋

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，主要涉及甲磺酸達(dá)比加群酯含量的檢測方法。

背景技術(shù)

達(dá)比加群酯（Pradaxa）是德國勃林格殷格翰公司研發(fā)生產(chǎn)的口服直接凝血酶抑制劑，它是達(dá)比加群（Dabigatran）的前體藥物，甲磺酸達(dá)比加是在達(dá)比加的基礎(chǔ)上經(jīng)過磺化反應(yīng)生成的產(chǎn)物。于2008年4月首次在德國和英國上市。達(dá)比加群酯具有直接抗凝血活性，與其他藥物作用少，可直接口服，無需進(jìn)行凝血測試，也不用改變飲食習(xí)慣，是預(yù)防中風(fēng)的推薦藥物。2008年歐盟獲準(zhǔn)用于全髖或全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后靜脈血栓的預(yù)防，2010年FDA批準(zhǔn)用于降低非瓣膜性房顫患者預(yù)防血栓和腦卒中的發(fā)生。甲磺酸達(dá)比加群酯是及華法林之后50年來首個上市的全新口服直接抗凝血藥物，是抗凝血治療領(lǐng)域和潛在致死性血栓領(lǐng)域的一項重大突破。

進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)中的檢測方法流速太大，對于硬件要求較高，而且峰純度因子小于990，峰不純。目前尚沒有甲磺酸達(dá)比加群酯的有效檢測方法，為了便于合成人員分析產(chǎn)率，特研究該分析方法，能夠簡單、快速而準(zhǔn)確的測定其含量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于公開一種有效且簡單的檢測甲磺酸達(dá)比加群酯含量的方法，能更好地對甲磺酸達(dá)比加含量進(jìn)行控制，指導(dǎo)工藝研究，提高產(chǎn)品質(zhì)量。

一種甲磺酸達(dá)比加群酯含量的檢測方法，具體的步驟如下：

1）色譜條件：HPLC法測定甲磺酸達(dá)比加群酯的色譜條件如下，色譜柱：phenomenex Gemini C18（150×4.6mm,5μm）；流動相：A：0.01mol/L的乙酸銨水溶液，乙酸調(diào)節(jié)pH至6.5；B ：甲醇；A：B=35：65等度洗脫；流速，1ml/min；柱溫：30℃；DAD檢測器；檢測波長272nm進(jìn)樣量：10μl。

2）檢測溶液的配制：

對照品溶液：精密稱取甲磺酸達(dá)比加群酯對照品適量，用甲醇溶解，定容，制成每1ml中含甲磺酸達(dá)比加群酯1mg的溶液；

供試品溶液：精密稱取甲磺酸達(dá)比加群酯供試品適量，用甲醇溶解，定容，制成每1ml中含供試品1mg的溶液。

分別精取對照液和供試液各10μl，注入色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得甲磺酸達(dá)比加群酯的標(biāo)示量。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：

通過有效的高效液相色譜法，檢測甲磺酸達(dá)比加群酯的含量，對其含量進(jìn)行精確檢測，有利于優(yōu)化工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量。

附圖說明

圖1為甲磺酸達(dá)比加群酯供試品的色譜圖；

圖2為甲磺酸達(dá)比加群酯對照品色譜圖；

圖3為甲磺酸達(dá)比加群酯濃度與峰面積線性圖。

具體實施方式

實施例1

準(zhǔn)確稱取10mg甲磺酸達(dá)比加群酯標(biāo)準(zhǔn)品溶于10ml容量瓶中， 用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為 1mg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

按上述方法準(zhǔn)確配制育亨賓標(biāo)準(zhǔn)溶液， 經(jīng) 0.2μm 微孔濾頭過濾后注入液相色譜儀中，按本發(fā)明確定的方法。所述的5個不同濃度的育亨賓標(biāo)準(zhǔn)溶液分別為0.8mg/ml，0.9mg/ml，1.1mg/ml，1.2mg/ml。以峰面積 (Y) 為縱坐標(biāo)，樣品濃度 (X) 為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸， 得 r ＝ 0.999， 線性關(guān)系很好， 見圖3。

其中，色譜柱：phenomenex Gemini C18（150×4.6mm,5μm）；流動相：A：0.01mol/L的乙酸銨水溶液，乙酸調(diào)節(jié)PH至6.5；B ：甲醇；A：B=35：65等度洗脫；流速，1ml/min；柱溫：30℃；DAD檢測器；檢測波長272nm進(jìn)樣量：10μl。

色譜條件：HPLC法測定甲磺酸達(dá)比加群酯的色譜條件如下，色譜柱：phenomenex Gemini C18（150×4.6mm,5μm）；流動相：A：0.01mol/L的乙酸銨水溶液，乙酸調(diào)節(jié)PH至6.5；B ：甲醇；A：B=35：65等度洗脫；流速，1ml/min；柱溫：30℃；DAD檢測器；檢測波長272nm進(jìn)樣量：10μl。

1）試驗針對色譜柱的柱溫、流速、流動相A（緩沖鹽）pH進(jìn)行了一系列的條件篩選。首先，將色譜柱的柱溫在原有30℃的條件下分別升高和降低5℃進(jìn)行試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柱溫在30℃時，甲磺酸達(dá)比加群酯（以下用DEM表示）色譜條件最佳。