[發明專利]一種豬瘟抗體檢測系統及其制備方法

有效

• 申請號: 201410526025.5
• 申請日: 2014-09-30
• 公開（公告）號: CN105527442B
• 公開（公告）日: 2018-09-11
• 發明（設計）人: 田克恭;楊凡力
• 申請（專利權）人: 洛陽普萊柯萬泰生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發明提供了一種豬瘟抗體檢測系統及其制備方法，所述檢測系統的包被原含豬瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白。其中所述豬瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白均為真核表達的重組蛋白，保證了正確的空間構象和翻譯后修飾過程，使抗原盡可能有效地與血清中抗體結合，提高了檢測的特異性、靈敏度和重復性。該發明可應用于豬瘟預防控制中豬瘟病毒抗體的診斷及豬瘟疫苗的免疫評價。

技術領域

本發明屬于分子生物學和家畜疫病診斷領域，具體涉及一種豬瘟抗體檢測系統及其制備方法。

背景技術

豬瘟是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的一種高度接觸性病毒傳染病，傳播快、流行廣、發病率和死亡率高，對我國養豬業危害極大。根據臨床癥狀和病程長短可將豬瘟分為急性型、慢性型、溫和型。病豬和帶毒母豬是豬瘟病毒的主要傳染源。世界動物衛生組織將其列為A類疾病，中國《動物防疫法》將其列為一類疫病。

豬瘟病毒屬黃病毒科瘟病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，基因組大小約為12.3Kb，含有一個大的開放閱讀框(ORF)，編碼一個多聚蛋白，此多聚蛋白經病毒和宿主細胞的酶作用，形成4個成熟的結構蛋白(C、Erns、E1、E2)和至少7個非結構蛋白(Npro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。

酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)因為其操作簡便，快速敏感的優點，廣泛應用于市場上的豬瘟抗體監測方法。目前，市場上的豬瘟抗體診斷ELISA試劑盒大多數是檢測豬血清中的E2蛋白抗體，而Erns蛋白作為包被原，僅用于鑒別診斷亞單位疫苗免疫后疫苗產生的抗體和野毒感染產生的抗體，且特異性和靈敏度均不理想。此類E2蛋白抗體檢測ELISA試劑盒針對豬瘟大規模的群體診斷中，能夠發揮有效的作用。

但是對于一些早期感染或者豬瘟抗體水平低下的臨床樣本，單純檢測E2蛋白抗體，有出現假陰性的可能。因此，建立一種準確可靠的新型ELISA檢測手段，用來彌補現有技術中單純檢測E2蛋白抗體的不足，對疾病的預防和控制有重要的意義。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本發明提供了一種豬瘟抗體檢測ELISA試劑盒，以及該試劑盒的制備與使用方法。

本發明的第一方面是一種豬瘟抗體檢測系統，所述系統包被抗原為豬瘟病毒E2蛋白、Erns蛋白。

術語“豬瘟病毒E2蛋白”位于病毒囊膜表面，由373個氨基酸組成，是豬瘟病毒主要保護性抗原，是抗豬瘟病毒感染的主要保護性抗原(李淼，王宇飛，王煜等.表達豬瘟病毒E2蛋白的BacMam病毒的構建及其免疫原性分析.生物化學與生物物理進展,2009,36(7):916-922)。

術語“豬瘟病毒Erns蛋白”為病毒的囊膜糖蛋白，由227個氨基酸組成，無跨膜區(高華峰，李富祥，張念祖等.豬瘟病毒Erns基因的克隆及原核表達.動物醫學進展,2007,28(2):22-24)。

作為本發明的一種優選實施方式，在本發明的豬瘟抗體檢測系統中，所述豬瘟病毒E2蛋白為實質上編碼序列SEQ ID No.2的蛋白，所述Erns蛋白為實質上編碼序列SEQ IDNo.4編碼的蛋白。

術語“實質上編碼”意指通過添加、刪除、替換一個或多個氨基酸后仍然保持原有蛋白相同或相近功能。

作為本發明的一種優選實施方式，在本發明的豬瘟抗體檢測系統中，所述豬瘟病毒E2蛋白含量為100-400ng，Erns蛋白含量為25-100ng。

作為本發明的一種最優選實施方式，在本發明的豬瘟抗體檢測系統中，所述豬瘟病毒E2蛋白含量為200ng，Erns蛋白含量為50ng。

作為本發明的一種優選實施方式，在本發明的豬瘟抗體檢測系統中，所述豬瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白為真核表達體系表達的重組蛋白。