[發(fā)明專利]一種豬瘟抗體檢測(cè)系統(tǒng)及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410526025.5
• 申請(qǐng)日: 2014-09-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105527442B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田克恭;楊凡力
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 洛陽(yáng)普萊柯萬(wàn)泰生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京華夏正合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營(yíng)

1.一種豬瘟抗體的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述ELISA檢測(cè)試劑盒包括各孔中包被有豬瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白的酶標(biāo)板；所述豬瘟病毒E2蛋白含量為100-400ng/孔，Erns蛋白含量為25-100ng/孔，其中，所述豬瘟病毒E2蛋白為實(shí)質(zhì)上編碼序列SEQ ID No.2的蛋白，所述Erns蛋白為實(shí)質(zhì)上編碼序列SEQ ID No.4編碼的蛋白；所述豬瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白為真核表達(dá)體系表達(dá)的重組蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述豬瘟病毒E2蛋白含量為200ng/孔，Erns蛋白含量為50ng/孔。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述真核表達(dá)體系為重組桿狀病毒表達(dá)體系。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述ELISA檢測(cè)試劑盒還包括樣品稀釋液、洗滌液、封閉液、帶標(biāo)記的二抗、顯色液、終止液、陽(yáng)性豬血清對(duì)照以及陰性豬血清對(duì)照。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液為含有0.05％V/VTween-20和10％V/V脫脂奶的磷酸鹽緩沖液；

所述洗滌液為含有0.05％V/VTween-20的磷酸鹽緩沖液；

所述封閉液為1％W/VBSA的磷酸鹽緩沖液、5％W/V脫脂奶粉的磷酸鹽緩沖液、1.5％V/V明膠的磷酸鹽緩沖液或5％V/V犢牛血清FCS的磷酸鹽緩沖液中的任一種；

所述顯色液包括顯色液A液和顯色液B液，所述顯色液A液含TMB 20mg、無(wú)水乙醇10ml，并用ddH₂O定容至100ml；所述顯色液B含檸檬酸2.1g、無(wú)水Na₂HPO₄ 2.82g、0.75％W/V的過(guò)氧化氫尿素0.64ml，并用ddH₂O定容至100ml；

所述終止液為2M的H₂SO₄。

6.一種如權(quán)利要求1所述的ELISA檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

步驟(1)克隆表達(dá)所述豬瘟病毒抗原性蛋白E2蛋白、Erns蛋白，使用所述E2蛋白和Erns蛋白包被酶標(biāo)板；

步驟(2)制備或配制樣品稀釋液、洗滌液、封閉液、HRP標(biāo)記的兔抗豬IgG、顯色液A液、顯色液B液、終止液、陽(yáng)性豬血清對(duì)照以及陰性豬血清對(duì)照；以及

步驟(3)將步驟(1)與(2)所制備的各成分組裝成試劑盒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中克隆表達(dá)E2蛋白為實(shí)質(zhì)上編碼序列SEQ ID No.2的蛋白，所述Erns蛋白為實(shí)質(zhì)上編碼序列SEQ ID No.4編碼的蛋白。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述E2蛋白含量為100-400ng/孔，Erns蛋白含量為25-100ng/孔。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述豬瘟病毒E2蛋白含量為200ng/孔，Erns蛋白含量為50ng/孔。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)使用真核表達(dá)體系表達(dá)豬瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制備方法，其特征在于，所述真核表達(dá)體系為重組桿狀病毒表達(dá)體系。

12.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述樣品稀釋液為含有0.05％V/VTween-20和10％V/V脫脂奶的磷酸鹽緩沖液；

所述洗滌液為含有0.05％V/VTween-20的磷酸鹽緩沖液；

所述封閉液為1％W/VBSA的磷酸鹽緩沖液、5％W/V脫脂奶粉的磷酸鹽緩沖液、1.5％V/V明膠的磷酸鹽緩沖液或5％V/V犢牛血清FCS的磷酸鹽緩沖液中的任一種；

所述顯色液包括顯色液A和顯色液B液，所述顯色液A液含TMB 20mg、無(wú)水乙醇10ml，并用ddH₂O定容至100ml；所述顯色液B含檸檬酸2.1g、無(wú)水Na₂HPO₄ 2.82g、0.75％W/V的過(guò)氧化氫尿素0.64ml，并用ddH₂O定容至100ml；

所述終止液為2M的H₂SO₄。