[發明專利]一種用于DisA表達的pEX-MBP重組質粒

在審

• 申請號: 201410525823.6
• 申請日: 2014-10-09
• 公開（公告）號: CN104293822A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 楊國宇;郭準;王江;王月影;郭豫杰;李和平;朱河水;鐘凱;魯維飛;韓立強;耿娟
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/66;C12N9/88
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

1.一種用于DisA蛋白表達的pEX-MBP重組質粒，其特征在于，所述pEX-MBP重組質粒的堿基序列如序列表所示。

2.權利要求1所述用于DisA蛋白表達的pEX-MBP重組質粒的制備方法，其特征在于，該重組質粒是在pBbB3a-GFP的基礎上改造而成的，包括以下步驟：

（1）將質粒pBbB3a-GFP上的SspⅠ位點進行突變；

（2）用NdeⅠ和BamHⅠ雙酶切步驟（1）中突變后的pBbB3a-GFP；

（3）用NdeⅠ和BamHⅠ雙酶切pMD19-T-His6?-MBP-TEV-LIC質粒；

（4）將步驟（2）和步驟（3）雙酶切產物進行連接即得pEX-MBP重組質粒。

3.如權利要求2所述pEX-MBP重組質粒的制備方法，其特征在于，步驟（1）中SspⅠ位點突變為將質粒pBbB3a-GFP上的279和5099處的SspⅠ點進行突變，將AAT/ATT突變為TAT/ATT。

4.權利要求1所述用于DisA蛋白表達的pEX-MBP重組質粒在制備可溶性的DisA蛋白中的應用，其特征在于，制備可溶性的DisA蛋白包括以下步驟：

（1）PCR克隆、擴增DisA基因；

（2）非酶連接方法將步驟（1）中擴增后DisA基因連接到pEX-MBP重組質粒上，構建重組質粒表達載體pEX-MBP-DisA；

（3）將重組質粒表達載體pEX-MBP-DisA轉化進入大腸桿菌BL21誘導表達，表達完成后破碎、離心、提純即可獲得DisA蛋白。

5.如權利要求4所述pEX-MBP重組質粒在制備可溶性的DisA蛋白中的應用，其特征在于，步驟（3）中所述誘導采用丙酸鈉作為誘導劑。