[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)谷胱甘肽釀酒酵母微生物制劑及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410519741.0
• 申請(qǐng)日: 2014-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN104286415A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許國煥;張麗;陳亞劍;程煒軒;郭瑩姿;魏逸峰;梁建慶;譚文俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所;廣東碧德生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A23K1/16
• 分類號(hào): A23K1/16
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于飼料領(lǐng)域，具體涉及一種高產(chǎn)谷胱甘肽釀酒酵母微生物制劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

釀酒酵母是我國農(nóng)業(yè)部允許作為飼料添加劑的菌種之一，其已被越來越多地研制成飼用微生態(tài)制劑。釀酒酵母其代謝產(chǎn)物富含氨基酸、維生素B、蛋白質(zhì)和多種酶等多種生理活性成分，尤其是含有豐富的谷胱甘肽(glutathione,GSH)，它是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。酵母菌及其代謝產(chǎn)物能夠提高動(dòng)物抗氧化能力，增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能，提高動(dòng)物抗病能力等，這些特性對(duì)保護(hù)動(dòng)物腸粘膜、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、促進(jìn)氨基酸、葡萄糖等營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收，增強(qiáng)動(dòng)物抗氧化能力，提高動(dòng)物的飼料轉(zhuǎn)化率和防病促進(jìn)生長起到重要作用。

因此在飼料中添加高產(chǎn)谷胱甘肽的酵母菌是一個(gè)十分綠色健康的選擇。

目前國內(nèi)外生產(chǎn)谷胱甘肽的方法主要有萃取法、化學(xué)合成法、發(fā)酵法、酶法，液體發(fā)酵法是當(dāng)前生產(chǎn)谷胱甘肽的主要方法，普遍使用的菌種是酵母菌，應(yīng)用微生物液體發(fā)酵的方法生產(chǎn)谷胱甘肽比較易于工業(yè)化，但其制備的釀酒酵母微生物制劑中，損失了酵母菌產(chǎn)生的所有代謝產(chǎn)物，僅保留酵母菌菌體，并且產(chǎn)量低，價(jià)格較高，同時(shí)添加到飼料中會(huì)提高飼料成本，制約其大規(guī)模使用。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明旨在提供一種高產(chǎn)谷胱甘肽釀酒酵母微生物制劑及其制備方法，利用該方法制備的釀酒酵母微生物制劑，其谷胱甘肽含量高、轉(zhuǎn)化率高、生產(chǎn)速率快，并且該方法反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)步驟簡單，成本低廉。

本發(fā)明的高產(chǎn)谷胱甘肽釀酒酵母微生物制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、菌種活化：將釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)GIM2.139活化后轉(zhuǎn)接到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中，28±1℃培養(yǎng)至菌濃度為1.0×10⁷cfu/mL～2.0×10⁸cfu/mL，形成種子培養(yǎng)液；

b、將種子培養(yǎng)液以質(zhì)量百分比3％～5％的接種量轉(zhuǎn)接到含有一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度28±1℃，攪拌速率200～350rpm，通氣量0.8～0.9V/V·min，溶氧濃度80～90％，發(fā)酵至釀酒酵母生長到對(duì)數(shù)生長期，將此對(duì)數(shù)生長期的菌液作為一級(jí)種子液；

c、將一級(jí)種子液以質(zhì)量百分比2～10％的接種量轉(zhuǎn)接到含有二級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行二級(jí)發(fā)酵，發(fā)酵溫度28±1℃，攪拌速率150～250rpm，通氣量0.8～0.9V/V·min，溶氧濃度70～80％，發(fā)酵至釀酒酵母生長到對(duì)數(shù)生長期，將此對(duì)數(shù)生長期的菌液作為二級(jí)種子液；

d、在無菌環(huán)境中，將二級(jí)種子液以質(zhì)量百分比2～10％的接種量接入麩皮固體培養(yǎng)基中，混合均勻，控制通風(fēng)量為：3～10換氣次數(shù)/小時(shí)，溫度25～32℃，濕度80％～90％條件下培養(yǎng)60～72小時(shí)，培養(yǎng)期間翻動(dòng)麩皮固體培養(yǎng)基，經(jīng)半成品檢驗(yàn)，每克濕菌體含活菌數(shù)20億～40億個(gè)活菌，30-45℃干燥處理后，得到高產(chǎn)谷胱甘肽釀酒酵母微生物制劑；

所述的一級(jí)和二級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)基都為：每升含有葡萄糖5～30g、蔗糖2～20g、糖蜜2～30g、NaCl3～10g、蛋白胨5～20g、磷酸氫二鉀1-15g，余量為水，pH6.0±0.2；

所述的麩皮固體培養(yǎng)基為：按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100％計(jì)，由麩皮38％～50％、豆粕10％～23％、尿素0.1％～0.5％、氯化銨0.1％～0.5％和水38％～51％組成。

該高產(chǎn)谷胱甘肽釀酒酵母微生物制劑經(jīng)包裝，成品檢測，儲(chǔ)存，可作為商品出售。

所述的將釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)GIM2.139活化優(yōu)選為將釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)GIM2.139劃線接種到麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基試管斜面，28℃培養(yǎng)24小時(shí)。

所述的步驟d的培養(yǎng)期間翻動(dòng)麩皮固體培養(yǎng)基優(yōu)選每隔3～5小時(shí)翻動(dòng)一次。

所述的麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基屬于現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)培養(yǎng)基，其配方為：每升含有麥芽膏粉130g，瓊脂20g，氯霉素0.1g，余量為水，pH6.0～6.2。

所述的YEPD液體培養(yǎng)基屬于現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)培養(yǎng)基，其配方為：每升含有酵母粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL，pH自然，115℃濕熱滅菌20min。

本發(fā)明相比于現(xiàn)有技術(shù)，具有優(yōu)點(diǎn)：