[發(fā)明專利]從叉子圓柏中同時制備高純度鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的方法

無效

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• 申請日: 2014-09-30
• 公開（公告）號: CN104277049A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設計）人: 陳平;樓輝;錢越英
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發(fā)明涉及從天然植物中制備活性成分的方法，具體涉及從叉子圓柏中同時制備高純度鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的方法。

背景技術

叉子圓柏，又名沙地柏、爬柏、臭柏、雙子柏、新疆圓柏。系柏科圓柏屬植物，匍匐灌木，主要分布于歐洲南部至中亞和我國西北部等干旱貧瘠環(huán)境中，耐旱性強，可作為水土保持及固沙造林的優(yōu)良樹種。叉子圓柏因具有殺蟲、殺菌、抗腫瘤、抗病毒等藥用價值而被廣泛關注。叉子圓柏中的有效組分可分為精油和非精油兩部分。精油部分以萜類為主，包括單萜類、二萜類、倍半萜類以及多萜類；非精油部分中成分較為復雜，其中以木脂素類和多酚類(包括黃酮類)化合物為主，并含有少量的香豆素類物質(zhì)、有機酸和甾醇等。木脂素類化合物是一類由苯丙素衍生物(C6-C3)聚合而成的天然化合物活性成分，是植物小分子量次生代謝產(chǎn)物，多以二聚體的形式存在，少數(shù)為三聚體和四聚體，具有結(jié)構(gòu)多樣性和廣泛的生物活性，在植物體內(nèi)大多呈游離狀態(tài)，也有與糖結(jié)合成甙存在于植物的樹脂狀物質(zhì)中，所在部位各異，分布于植物的根、莖、葉、花、果實等部位。從叉子圓柏中分離出的木脂素類化合物中又以鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的含量最高。

對于鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的分離和純化，現(xiàn)有技術一般采用柱層析和重結(jié)晶精制(中國專利申請CN101967151A；CN101503410A；CN101805348A)，工藝方法上存在著分離、純化步驟繁多、復雜的問題。由于鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)十分相近，純化難度大，分離后雖然其純度可進一步提高，但得率大幅下降，而且由于采用了層析柱，設備投資較大，操作煩瑣，溶劑消耗量大，柱層析時還會使樣品容易被不可逆吸附在柱填料上而損失，并且由于木脂素類化合物的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性，在固體填料上還會發(fā)生開環(huán)和異構(gòu)化等反應，因而分離效率較低。而高速逆流色譜是新型的現(xiàn)代色譜分離技術，它是基于運轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)兩相溶劑的單向性流體動力學現(xiàn)象而獲得高效率分離的色譜系統(tǒng)，是一種連續(xù)的無需任何固體填料的高效、快速的液—液分配色譜分離技術，避免了因固體填料帶來的樣品不可逆吸附、沾污和變性等各種問題，分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環(huán)境緩和，而且節(jié)約溶劑，分離結(jié)果能達到相當高的純度。迄今為止，尚未見文獻和專利報道從較低純度的叉子圓柏的乙醇提取浸膏中，直接采用高速逆流色譜法同時分離純化制備鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決以上提出的問題，提供一種從叉子圓柏中同時制備高純度鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的方法，該方法操作簡便、分離效率高。

一種從叉子圓柏中同時制備高純度鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的方法，包括以下步驟：

(1)將叉子圓柏粉碎成粗粉，以乙醇水溶液進行提取，得到的提取液濃縮后，冷凍干燥得到乙醇提取浸膏；

其中，所述的叉子圓柏選用叉子圓柏的莖、葉或果實(球果)；所述的乙醇水溶液的質(zhì)量百分比為70～95％；所述的提取方法為冷浸和滲漉；

(2)以溶劑A、溶劑B、溶劑C和溶劑D組成高速逆流溶劑系統(tǒng)，將所述高速逆流溶劑系統(tǒng)充分混合后靜置，按上下兩相分開，取上相為固定相，取下相為流動相；

其中，溶劑A為鹵代烷烴或脂肪烷烴；

溶劑B為脂肪酸酯；

溶劑C為脂肪醇；

溶劑D為水或者脂肪酸的水溶液；

(3)將步驟(2)得到的固定相用氣壓方式壓入并充滿高效逆流色譜儀的主機工作鼓，開啟逆流色譜儀，使主機轉(zhuǎn)動，用流量泵泵入步驟(2)得到的流動相，取步驟(1)得到的乙醇提取浸膏溶解于流動相中進樣，分別收集鬼臼毒素的洗脫液和脫氧鬼臼毒素的洗脫液，濃縮后得到所述的鬼臼毒素和所述的脫氧鬼臼毒素。

本發(fā)明提供的方法，以高速逆流色譜作為分離裝置，實現(xiàn)了結(jié)構(gòu)和性質(zhì)十分相近的木脂素類化合物鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素的同時分離和純化，也為天然藥用植物質(zhì)量控制所需要的高純度對照品的制備提供一種實用的新技術方法。

作為優(yōu)選，所述的鹵代烷烴為二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷中的至少一種，包括任一種或任意種以任意比例混合的混合物。

作為優(yōu)選，所述的脂肪烷烴為正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、石油醚中的至少一種，包括任一種或任意種以任意比例混合的混合物。

作為優(yōu)選，所述的脂肪酸酯為乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯中的一種或任意兩種等容積的混合物；作為進一步的優(yōu)選，所述脂肪酸酯為乙酸乙酯。