[發明專利]制備頭孢菌素C的發酵方法和該方法中使用的發酵培養基

有效

• 申請號: 201410519492.5
• 申請日: 2014-09-30
• 公開（公告）號: CN104263792B
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 苗瑞春;彭亮亮;馮濤;李樹有;任廣宏;張虎
• 申請（專利權）人: 國藥集團威奇達藥業有限公司
• 主分類號: C12P35/06
• 分類號: C12P35/06;C12R1/75
• 代理公司: 北京鴻元知識產權代理有限公司11327
• 代理人: 黃麗娟

1.一種制備頭孢菌素C的發酵方法，該方法包括如下步驟：

步驟1：取頂頭孢霉，經活化后，接種至種子培養基中，在pH 6.8～7.2、溫度27～30℃下培養60～80小時，制備種子，其中所述種子培養基組成如下：

以去離子水為介質，豆餅粉25～35g/L，玉米漿14～25g/L，蔗糖23～32g/L，葡萄糖8～12g/L，碳酸鈣4～6g/L，以及豆油9～20mL/L；

步驟2：將上述步驟1制得的種子接種至發酵培養基中，在pH 5.2～5.8、溫度24～29℃，發酵110～150小時，其中所述發酵培養基組成如下：

以去離子水為介質，氨基己二酸3～12g/L，花生粉25～45g/L，棉籽蛋白17～30g/L，谷朊粉30～50g/L，豆餅粉20～35g/L，玉米漿40～70mL/L，葡萄糖5～10g/L，蔗糖10～20g/L，蛋氨酸9～15g/L，硫酸銨10～20g/L，硫酸鈣12～18g/L，碳酸鈣5～9g/L，豆油70～120mL/L，以及消泡劑1～2mL/L，

且在發酵過程中，溶解氧濃度在30％以上；根據需要補加硫酸銨、豆油、消泡劑和氨水；

步驟3：將步驟2所得發酵液離心分離，取上層澄清液體，得到頭孢菌素C上清液。

2.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征是，在所述步驟1中，所述頂頭孢霉來源于ATCC，保藏號為36225；所述頂頭孢霉進行斜面培養活化，斜面培養基組成為：以去離子水為介質，麥芽汁10～15g/L，蛋白胨10～15g/L，以及瓊脂22g/L，消前pH為7.0～7.4；斜面培養方法為：在27℃～29℃，相對濕度40％～65％下，培養11～13天。

3.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征是，在所述步驟2中，取上述步驟1制得的種子液，菌絲濃度為16％～22％，按照15％～20％(體積)的接種比例接種于發酵培養基中，在pH 5.2～5.8、溫度24～29℃，發酵110～150小時，其中所述發酵培養基組成如下：以去離子水為介質，氨基己二酸5～10g/L，花生粉28～40g/L，棉籽蛋白20～30g/L，谷朊粉32～45g/L，豆餅粉24～32g/L，玉米漿40～65mL/L，葡萄糖5.5～10g/L，蔗糖12～19g/L，蛋氨酸9～14g/L，硫酸銨11～19g/L，硫酸鈣14～18g/L，碳酸鈣5.5～8g/L，豆油75～115mL/L，以及PPG2000 1～2mL/L。

4.根據權利要求2所述的發酵方法，其特征是，在所述步驟2中，取上述步驟1制得的種子液，菌絲濃度為16％～22％，按照15％～20％(體積)的接種比例接種于發酵培養基中，在pH 5.2～5.8、溫度24～29℃，發酵110～150小時，其中所述發酵培養基組成如下：以去離子水為介質，氨基己二酸5～10g/L，花生粉28～40g/L，棉籽蛋白20～30g/L，谷朊粉32～45g/L，豆餅粉24～32g/L，玉米漿40～65mL/L，葡萄糖5.5～10g/L，蔗糖12～19g/L，蛋氨酸9～14g/L，硫酸銨11～19g/L，硫酸鈣14～18g/L，碳酸鈣5.5～8g/L，豆油75～115mL/L，以及PPG2000 1～2mL/L。

5.根據權利要求3所述的發酵方法，其特征是，在所述步驟2中，所述發酵培養基組成如下：以去離子水為介質，氨基己二酸5g/L，花生粉28g/L，棉籽蛋白20g/L，谷朊粉32g/L，豆餅粉24g/L，玉米漿40mL/L，葡萄糖6g/L，蔗糖13g/L，蛋氨酸10g/L，硫酸銨11g/L，硫酸鈣14g/L，碳酸鈣5.5g/L，豆油75mL/L，以及PPG2000 1mL/L。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的發酵方法，其特征是，在所述步驟2中，在發酵40～70h之間，以0.1～0.3g/L/h的速率補加硫酸銨，70h后停止補加硫酸銨；在發酵50～120h之間，以2～5g/L/h的速率補加豆油，120h后停止補加豆油；在發酵120～145h之間補加PPG2000進行消泡處理，補加量為0.03～0.06g/L泡沫發酵液總量，以消除泡沫。