[發明專利]重組蛋白HarpinZΔ89-124的應用有效
| 申請號： | 201410516133.4 | 申請日： | 2014-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN104322530A | 公開（公告）日： | 2015-02-04 |
| 發明（設計）人： | 高學文;張陽;李響;伍輝軍 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | A01N47/44 | 分類號： | A01N47/44;A01P21/00;A01P1/00;A01P3/00;C07K14/21;C12N15/70 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬濤 |
| 地址： | 211225 江蘇省南京市溧*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 蛋白 harpinz sub 89 124 應用 | ||
1.氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示的重組蛋白HarpinZΔ89-124在提高煙草抗煙草花葉病毒病效果、促進水稻根部生長、提高水稻抗白葉枯病效果中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的重組蛋白HarpinZΔ89-124通過以下步驟制備得到：
(1)以DH5α/pMD18-T-hrpZPsgS1菌株提取的質粒DNA為模板，用上游引物hrpZΔ89-124-P1、下游引物hrpZΔ89-124-P2進行反向PCR擴增，用凝膠回收試劑盒將反向PCR擴增的片段回收純化，利用T4DNA連接酶將回收后的片段進行DNA分子自行環化后，轉入大腸桿菌DH5α，經酶切及測序驗證得到陽性重組菌株DH5α/pMD18T-hrpZΔ89-124，其中上游引物hrpZΔ89-124-P1序列如SEQ?ID?NO.3所示，下游引物hrpZΔ89-124-P2序列如SEQ?ID?NO.4所示；
(2)陽性重組菌株DH5α/pMD18-T-hrpZΔ89-124提質粒DNA，經BamH1和EcoR1雙酶切后連接到表達載體pET30a(+)上，轉入大腸桿菌BL21后經質粒PCR及酶切鑒定出陽性菌株BL21/pET30a(+)-hrpZΔ89-124；
(3)利用LB培養基培養陽性菌株BL21/pET30a(+)-hrpZΔ89-124，并利用IPTG誘導重組蛋白表達，菌體經超聲波破碎獲得粗提蛋白，純化后得純化的重組蛋白HarpinZΔ89-124。
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