[發明專利]一種利用DF1傳代細胞生產偽狂犬病活疫苗的方法及其制品

在審

• 申請號: 201410515820.4
• 申請日: 2014-09-30
• 公開（公告）號: CN105521487A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 吳文福;林旭埜;張毓金;任向陽;賴月輝;黃秋雪;牛曉蕓
• 申請（專利權）人: 廣東永順生物制藥股份有限公司
• 主分類號: A61K39/245
• 分類號: A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種利用DF1傳代細胞生產偽狂犬病活疫苗的方法及其制品，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

我國目前生產偽狂犬病活疫苗所用的細胞為雞胚成纖維原代細胞。用雞胚成纖維原代細胞培養偽狂犬病病毒，產毒滴度不高；雞胚成纖維原代細胞的制造因每批雞胚原材料的差異，細胞批間差異較大；雞胚成纖維原代細胞細胞碎片與雜蛋白多，接種豬易引起過敏反應。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是提供一種克服上述缺陷的利用DF1傳代細胞生產偽狂犬病活疫苗的方法。

為達到上述目的，本發明提供一種利用DF1傳代細胞生產偽狂犬病活疫苗的方法，包括如下步驟：

(1)用DF1傳代細胞培養偽狂犬病病毒弱毒株；

(2)收獲所述步驟(1)得到的細胞培養毒液；

(3)在所述步驟(2)得到的細胞培養毒液中加入穩定劑和抗菌素，經冷凍真空干燥得到偽狂犬病DF1細胞活疫苗。

進一步地，其中所述方法中使用轉瓶或生物反應器進行培養。

進一步地，其中所述步驟(1)包括如下步驟：

(1a)制苗用細胞的傳代與培養：所述傳代細胞經EDTA-胰酶細胞分散液消化傳代，用細胞生長液繼續培養，形成DF1傳代細胞單層；

(1b)細胞毒種的繁殖：將所述偽狂犬病病毒弱毒株接種至所述步驟(1a)中得到的DF1傳代細胞單層，用細胞維持液繼續培養；2~3日后收獲細胞培養毒液作為生產用毒種；

(1c)制苗毒液的繁殖：取所述步驟(1a)中得到的DF1傳代細胞單層，棄去所述細胞生長液，接種含所述步驟(1b)中得到的毒種的細胞維持液，繼續培養。

進一步地，其中所述步驟(1b)得到的細胞毒種，每1ml含病毒≥10⁸TCID₅₀。

進一步地，其中所述步驟(1a)、(1b)、(1c)中的細胞培養所用的溫度為36℃~37℃。

進一步地，其中所述步驟(1b)、(1c)中接種時的接種量按體積百分比計為含1%～2%生產用細胞毒種的維持液。

進一步地，其中所述步驟(1a)中的細胞生長液含90%～92％MEM液、8%～10％犢牛血清和100~200單位/ml青鏈霉素，所述細胞生長液的pH值為7.0～7.2，其中MEM液和犢牛血清的單位為體積百分比。

進一步地，其中所述步驟(1b)和(1c)中的細胞維持液含95%～98％MEM液、2%～5％犢牛血清和100~200單位/ml青鏈霉素，所述細胞維持液的pH值為7.2～7.4，其中MEM液和犢牛血清的單位為體積百分比。

進一步地，其中所述步驟(2)包括如下步驟：接毒后2~3日收獲細胞培養毒液，收獲的毒液置-20℃以下保存。

進一步地，其中所述步驟(2)收獲的毒液，每1ml含病毒≥10⁸TCID₅₀；

進一步地，其中所述步驟(3)得到的偽狂犬病DF1細胞活疫苗，每頭份疫苗含病毒≥10⁶TCID₅₀。

另外，本發明還提供一種偽狂犬病活疫苗，所述偽狂犬病活疫苗通過上述方法制得。

本發明實現的技術效果如下：

1、利用DF1傳代細胞生產偽狂犬病活疫苗，具有生產工藝簡單且穩定、易操作，病毒含量高，批間差異小，質量易控，可顯著提高疫苗產量和質量，減少過敏反應等優點；

2、利用本發明生產的偽狂犬病活疫苗安全性好、免疫效力高，對偽狂犬病強毒攻擊具有較好的免疫保護作用；

3、利用DF1傳代細胞培養偽狂犬病病毒弱毒，因DF1傳代細胞是異源傳代細胞，可避免同源細胞帶未知豬源微生物的可能，更能保證疫苗的純凈。

附圖說明

圖1：偽狂犬病DF1傳代細胞活疫苗的生產工藝流程圖。

圖2：免疫接種豬的血清抗體消長規律圖。

具體實施方式