[發(fā)明專利]一種甲氧芐啶半抗原化合物T1制備完全抗原的方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410510867.1
• 申請(qǐng)日: 2014-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN104370829A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 匡華;徐乃豐;胥傳來(lái);徐麗廣;馬偉;劉麗強(qiáng);宋珊珊;吳曉玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D239/49
• 分類號(hào): C07D239/49;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/543
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

1.一種甲氧芐啶半抗原化合物T1的制備方法，其特征在于：

甲氧芐啶半抗原化合物T1結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式如下：

制備步驟為：在100mL的三頸瓶中依次加入?10mL吡啶、2g丁二酸酐、5mg?4-二甲氨基吡啶，60℃水浴加熱磁力攪拌至溶液澄清；另以?10mL?吡啶溶解2.9g甲氧芐啶并滴加到所述三頸瓶中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)3天；采用薄層色譜法，以甲醇︰三氯甲烷體積比為1︰5作為展開劑監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程；減壓蒸餾將溶劑全部蒸走，得到淡黃色油狀物；繼續(xù)滴加質(zhì)量體積比為10%的NaHCO₃水溶液至不再產(chǎn)生渾濁，過(guò)濾并調(diào)節(jié)上清液在酸性條件下重結(jié)晶析出白色固體，離心烘干即得產(chǎn)品甲氧芐啶半抗原化合物T1。

2.用權(quán)利要求1所述方法制得的甲氧芐啶半抗原化合物T1制備甲氧芐啶完全抗原的方法，其特征在于：將甲氧芐啶半抗原化合物T1與載體蛋白偶聯(lián)后制備得到甲氧芐啶完全抗原。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述甲氧芐啶半抗原化合物T1制備甲氧芐啶完全抗原的方法，其特征在于：所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白OVA、匙孔血藍(lán)蛋白KLH、血藍(lán)蛋白LPH或人血清白蛋白HAS中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述甲氧芐啶半抗原化合物T1制備甲氧芐啶完全抗原的方法，其特征在于：當(dāng)載體蛋白為BSA時(shí)，具體步驟為：

（1）甲氧芐啶半抗原化合物T1的活化：將甲氧芐啶半抗原化合物T1用DMF溶解，按甲氧芐啶半抗原化合物T1︰三正丁胺︰氯甲酸異丁酯的摩爾比為1︰1.2︰1.2比例添加反應(yīng)物，0℃反應(yīng)1h，得到活化的甲氧芐啶半抗原化合物T1溶液；

（2）載體蛋白BSA溶液的配制：取BSA，使甲氧芐啶半抗原化合物T1︰BSA的摩爾比為100︰1，用?0.01M?pH6.5的磷酸鹽緩沖液溶解BSA，0℃預(yù)冷30min，其中溶解后的BSA濃度大于3mg/mL，且磷酸鹽緩沖液與DMF的體積比例為5︰1，得到BSA溶液；

（3）甲氧芐啶完全抗原的制備：在0℃條件下，將步驟（1）所得14.5mg/mL活化的甲氧芐啶半抗原化合物T1溶液1mL，慢速滴加到步驟（2）所得22mg/mL?BSA溶液3mL中，0℃條件下反應(yīng)2h，然后室溫下反應(yīng)12h；用PBS緩沖液透析3天，期間換水8次，即得到甲氧芐啶完全抗原T1-MA-BSA。

5.用權(quán)利要求2或4所述方法制備的甲氧芐啶完全抗原的應(yīng)用，其特征在于：通過(guò)甲氧芐啶完全抗原免疫得到多克隆抗體和/或單克隆抗體，用于檢測(cè)甲氧芐啶。